注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：檸檬酸合酶(CS）測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
檢測方法：可見分光光度法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6336
產(chǎn)品分類：輔酶Ⅰ系列
商品介紹：
測定意義 測定意義: CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質(zhì)中，是三羧酸循環(huán)第一個限速酶，是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點之一。 測定原理 CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰，進一步水解產(chǎn)生檸檬酸；該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
2 ug pKH3 pKH3 低溫運輸，-20℃保存
沙氏瓊脂培養(yǎng)基 Sabouraud’s Agar 250g
1瓶 MDA-MB-231細胞株 MDA-MB-231 低溫運輸和保存
EC肉湯 E.Coli Broth 250g
100U 尿酸 Uricase -20℃保存
500mL TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) TBS-Tween-20 (TTBS),20X,in Classical TBS) 常溫保存
20次 一站式GST標記蛋白質(zhì)微量純化套裝(超聲破碎細胞) One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack 介質(zhì)需4℃保存，、Benzonase和PMSF需-20℃保存
2 ug pSUPERIOR.puro pSUPERIOR.puro 低溫運輸，-20℃保存
5次 Southern級動物DNAout Southern Grade Animal DNAOUT 4℃保存，蛋白K需要低溫運輸，-20℃保存
2 ug pCold TF pCold TF 低溫運輸，-20℃保存
NAC液體培養(yǎng)基 NAC Solid Medium 250g
檸檬酸合酶(CS）測試盒可見分光光度法CADM2/IGSF4D/Cell adhesion molecule 2 細胞粘附分子2 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-MSK1 (Ser376) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
KLHL32 Kelch樣蛋白32抗體 規(guī)格: 0.2ml
P45017A1/Cytochrome P450 17A1 P450 17A1抗體 規(guī)格: 0.1ml
CEP76 中心體蛋白質(zhì)76抗體 規(guī)格: 0.2ml
EGF 表皮生因子抗體 0.1ml
CD172a/SIRP Alpha 信號調(diào)節(jié)蛋白α抗體 規(guī)格: 0.2ml
PFKFB1 果糖-2,6-二磷酸1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-IKKi/IKKe(Ser172) 磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激i抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CASC3(Tyr181) 磷酸化瘤易候選基因3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Bad(Ser136) 磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
VASP 管擴張刺激磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
