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上??畦b生物科技有限公司
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閱讀:1364發(fā)布時間:2013-2-27
有些實驗室設備可以說是無處不在,看看周圍,基本上每個實驗室都擁有移液槍和離心機,當然還有酶標儀。從化學、藥物研發(fā)到蛋白質(zhì)組學,酶標儀是許多實驗室*的中高通量檢測設備,可以進行酶聯(lián)免疫吸附ELISA、NADH定量、蛋白相互作用分析和酒類檢測等等。
酶標儀實際上是一種能夠放入微孔板并進行讀取的微孔板檢測儀。市面上,酶標儀有多種讀取模塊可選,包括zui經(jīng)典的吸收光、熒光和發(fā)光檢測三模塊,還有一些特殊的功能模塊,例如時間分辨熒光、熒光偏振、熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET、和濁度測定等等。濁度測定是通常用于溶解度和濁度分析的光散射檢測法。
zui常用的酶標儀檢測模塊是吸收光、熒光和發(fā)光檢測。我們既可以選擇只具有某一種功能的單模塊酶標儀,也可以選擇兼具不同功能的多模塊酶標儀。市面上大多數(shù)廠商所提供的酶標儀,類型多檢測范圍廣,不過也有一些公司專攻特殊領域,例如Biochrom公司和Bio-Rad Laboratories就專注于吸收光檢測。酶標儀的應用
下手任何商品之前我們都會首先考慮到它的應用,在選擇酶標儀時我們自然也會先想想要用它來做什么。如果我們只是做個ELISA在溶液中定量特定蛋白,那么可以選擇能在可見光范圍內(nèi)檢測吸光度的酶標儀。對于Bradford法等蛋白定量實驗來說,也同樣如此。不過,如果我們既需要定量核酸又要定量蛋白,那么就應該選擇能夠讀取紫外光的酶標儀。從根本上來說,一個吸收光模式的酶標儀,就是一個可以讀取微孔板的分光光度計。
如果我們需要構(gòu)建熒光素酶報告系統(tǒng),用其轉(zhuǎn)染細胞并定量其表達,那么就需要能夠進行發(fā)光檢測的酶標儀。若要用酶標儀進行熒光檢測,那么就得先確定是只需熒光強度檢測,還是需要時間分辨熒光等其他應用。(時間分辨熒光技術中,背景信號在檢測前衰減,以此增強信噪比。)有些酶標儀可以支持特定的第三方應用,例如CisBio公司的均相時間分辨熒光HTRF實驗,PerkinElmer公司的AlphaScreen® 和AlphaLISA® 實驗等。
若是你對細胞學實驗感興趣,那么就應當選擇可以從微孔板底部讀數(shù)的酶標儀,因為細胞一般都長在微孔底部,從底部讀取可以增加檢測的靈敏度和信噪比。目前,用成像技術進行細胞學研究已經(jīng)成為一股潮流,不過這樣的技術成本高檢測速度也比較慢,而酶標儀快速讀取分析的能力使其更能滿足日益增長的通量需求。
有時可能我們并不確定未來的應用方向,或者很可能會用到多種檢測模式(例如需進行多個項目的大型實驗室),這時就可以考慮多模塊酶標儀。相對于單模塊而言,多模塊酶標儀雖然價格較高但其靈活性也更強。
配套微孔板
絕大多數(shù)酶標儀可以兼容96孔和384孔微孔板,若要使用更高密度的微孔板,就需要相應的模塊。專為高通量篩選設計的微孔板一般有1536孔,超高密度能達到3456孔,但支持這種超高密度微孔板的酶標儀比較少。同樣,有些酶標儀也不能支持低密度微孔板,例如細胞培養(yǎng)實驗中的6孔或24孔板。
速度和通量
如果實驗室每天都要進行大量的樣本分析,檢測幾十塊微孔板,那么就需要考慮到每塊板的檢測時間,如果時間過長就可能對后檢測的樣品造成影響。有些酶標儀只有一個通道,有些酶標儀具有八個通道。即使是單通道酶標儀,不同系統(tǒng)的讀取速率也不盡相同,讀取96孔板可能需要25s或15s。八通道酶標儀讀取速度要快得多,單個波長下讀取整塊96孔板僅需4s。
若是微孔板檢測的量很大,我們還可以選擇帶有plate stacker的酶標儀,或者考慮將酶標儀整合到自動化工作流程中。假如待測樣品中的信號會很快衰退需盡快讀取,那么選擇整合有液體處理系統(tǒng)的酶標儀,或者給酶標儀配上自動注射裝置。
給定檢測模塊可用的檢測器數(shù)量,也同樣會影響酶標儀檢測的速度。配備多個檢測器可以同時讀取多個孔,也可以同時讀取一個孔中的多種信號。配備多個光電倍增管的熒光檢測系統(tǒng)能夠使檢測速度顯著提高,在某些情況下能將檢測時間減少一半。
光學系統(tǒng)
購買酶標儀時,選擇合適的光學系統(tǒng)很重要。絕大多數(shù)酶標儀要么是濾光片型,要么是單色器型(包括光柵和棱鏡)。一般來說,濾光片比單色器更靈敏,但一個濾光片只能檢測一個特定波長,這限制了濾光片系統(tǒng)的靈活性。單色器系統(tǒng)一般通過光柵選擇特定波長,其靈活性就比濾光片要大,不過其檢測速度稍慢。單色器系統(tǒng)能夠進行光譜掃描,而濾光片系統(tǒng)就無法實現(xiàn)。
有些廠家將濾光片的靈敏性與單色器的波長選擇能力結(jié)合起來,例如Molecular Devices公司為其SpectraMax Paradigm平臺推出的TUNE波長可調(diào)節(jié)檢測卡盒(TUNE detection cartridge)。還有BioTek公司的Hybrid Technology系統(tǒng),該系統(tǒng)將濾光片和單色器組合起來,想用濾光片時選濾光片,想用光柵時選光柵。此外,BMG LABTECH公司的分光光度計利用棱鏡分光并投射到CCD裝置上,能夠同時實現(xiàn)200到1000 nm波長范圍內(nèi)的檢測。
升級能力
實際上真正把升級能力利用起來的用戶并不多,換句話說大多數(shù)用戶從來不曾真去升級,不過它的確能使你的系統(tǒng)不那么容易過時,也能為日后拓展應用省下一筆開支。如果目前我們的資金無法一次配齊全套檢測模塊,那么可以先支出較少的入門費用,等日后再逐步升級。
其他因素
根據(jù)實驗的不同需要,我們在購買酶標儀之前,可能還需要考慮到溫度控制、氣體控制(為細胞實驗控制氧氣/二氧化碳條件)、振搖、一體化液體處理系統(tǒng)(能在讀數(shù)前添加試劑)等等。此外,有時還要考慮到廠家所能提供的各項認證,例如IQ、OQ和PQ;21 CFR 11;GLP和GMP等。
如果我們所要檢測的樣品量很小,就需要采用微量的檢測裝置,例如Tecan公司的NanoQuant Plate,Thermo公司的μDrop Plate,BioTek公司的Take3超微量檢測板等等,上述裝置可以同時對16個2μL樣品進行DNA 或RNA定量。
軟件的數(shù)據(jù)分析和用戶界面也是需要考慮的因素。對此我們可以提出以下問題:軟件是否直觀簡便?是否支持多個使用者?是否簡化了校準等維護程序?是否需要軟件許可證?
zui后專家提醒我們,在選擇酶標儀時,應當將其視為工作流程的一部分。酶標儀的檢測很快,但還是需要一些人工操作的,尤其是對于96孔板或384孔板檢測。如果檢測量很大,就有必要購入洗板機。一切的一切,都是為了提高檢測的信噪比,獲得的實驗結(jié)果。
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