有兩種方法可以使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基(SFM):
1.直接適應(yīng)法式—將細(xì)胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基中。
2.連續(xù)適應(yīng)或循序隔絕法—分幾步將細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無(wú)血清培養(yǎng)基中。與直接適應(yīng)法相比較，連續(xù)適應(yīng)法對(duì)于細(xì)胞更溫和些。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基，關(guān)鍵是細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)滿足以下條件：
1.處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期
2.存活率大于90%
3.在適應(yīng)期間，以較高的初始細(xì)胞接種量進(jìn)行接種下面列出了常規(guī)適應(yīng)步驟。初始細(xì)胞接種量、細(xì)胞產(chǎn)量和培養(yǎng)周期是連續(xù)優(yōu)化的良好開端。
有些類型的細(xì)胞可以直接從含有血清培養(yǎng)基適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng)，細(xì)胞接種量應(yīng)在2.5 x 105 -3.5 x 105細(xì)胞/ml范圍內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1 x 106-3 x 106細(xì)胞/ml時(shí)，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)4至7天后，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2 x 106 -4 x 106細(xì)胞/ml時(shí)，細(xì)胞已*適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1x 106 -3 x 106細(xì)胞/ml且存活率為90%時(shí)，應(yīng)當(dāng)每隔3到5天再次將適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的貯存細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
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