藥品名稱：
通用名：人髓過氧化物酶（MPO）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
英文名：Human MPO ELISA Kit
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關(guān)組織液中髓過氧化物酶（MPO）的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人髓過氧化物酶（MPO）水平。用純化的人髓過氧化物酶（MPO）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入髓過氧化物酶（MPO），再與HRP標記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的髓過氧化物酶（MPO）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人髓過氧化物酶（MPO）的含量。
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 30ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（900U/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本處理及要求
1．血清、血漿標本可直接測定；
2．組織：取相關(guān)組織1g 于5ml PBS中勻漿，室溫孵育5小時（期間不時旋渦混合）后，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，取上清液待測。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
操作步驟
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為 600 U/L，400 U/L ，200 U/L，100 U/L，50 U/L）。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
