ELISA試劑盒實驗具體步驟解析

1.ELISA試劑盒將抗原抗體反響固相化：即實驗中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體外表。其機制可能是聚苯乙烯外表間的疏水基團能夠無挑選性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，堅持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性；
2.關(guān)閉：固相吸附蛋白對錯特異性的，在包被意圖免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相外表依然有吸附其它蛋白的才能，為了保證抗原抗體反響的特異性，因而，包被剩下的固相外表應(yīng)該用抗原抗體反響無關(guān)蛋白關(guān)閉。一般以為牛血清白蛋白是zui為抱負(fù)的關(guān)閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
3.抗原抗體反響：抗原或抗體在恰當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進行特異的抗原抗體反響。
4.酶反響：酶能夠經(jīng)過共價鍵與抗原或抗體連接構(gòu)成物，當(dāng)抗原抗體反響的時分，被檢查靶方針中也了酶分子。
5.底物反響：在抗原抗體中的酶分子，能夠促使底物發(fā)作色彩反響，檢查人員能夠裸眼調(diào)查，能夠經(jīng)過色彩來斷定是不是有免疫反響的存在，經(jīng)過色彩的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量，也可借用酶標(biāo)儀在恰當(dāng)?shù)牟ㄩL讀取吸光度值。
ELISA試劑盒的基本原理即是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反響，并經(jīng)過酶催化底物發(fā)作化學(xué)變化將抗原抗體反響經(jīng)過色彩的方式顯現(xiàn)出來。