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為什么神經(jīng)干細胞要懸浮培養(yǎng)?
神經(jīng)干細胞和其他干細胞一樣,在體內(nèi)也是和周圍細胞及基質(zhì)黏附在一起的,這樣看來,它應(yīng)該是貼壁生長的。但為什么我們要懸浮培養(yǎng)呢?是為了抑制其分化?那為什么懸浮的時候它不容易分化,而貼壁反而容易分化呢?
另外,既然神經(jīng)干細胞在體內(nèi)黏附生長,那么在體外懸浮培養(yǎng)為什么不會死亡呢(其他的細胞基本都會死亡)?據(jù)我所知,能夠懸浮培養(yǎng)的細胞主要是(造)血細胞和神經(jīng)干細胞,而血細胞在體內(nèi)就是懸浮的,這可以理解,但神經(jīng)干細胞在體內(nèi)卻不是這樣的。
據(jù)此,我認為,神經(jīng)干細胞在體外貼壁生長更符合其在體內(nèi)的情況,能更好地抑制其分化。當然這需要我們找到一種更好的培養(yǎng)底物。
請結(jié)合 Gage FH: Mammalian neural stem cells. Science 2000,287:1433-1438.
Reynolds, B. A. & Rietze, R. L. Neural stem cells and neurospheres — re-evaluating the relationship. Nature Methods 2, 333–336 (2005)兩篇綜述。
*篇參考文文獻雖然是2000年的,但是大牛Gage對體外、體內(nèi)移植和內(nèi)源的神經(jīng)干細胞研究都做了非常富有邏輯性的討論,告訴我們什么才是神經(jīng)干細胞,其中的大部分觀點對目前的神經(jīng)干細胞研究還具有非常大的指導意義。
第二篇是神經(jīng)干細胞懸浮培養(yǎng)的 Reynolds寫的,他用自己實驗室的數(shù)據(jù)說明了神經(jīng)球和神經(jīng)干細胞的關(guān)系,盡管神經(jīng)干細胞的存在可以用成球?qū)嶒瀬頇z測,但是能夠成球并不一定是干細胞。他用事實說明一個細胞能成球甚至二次三次成球也不能代表它就是神經(jīng)干細胞,在他的系統(tǒng)中,成球細胞的比例為2.4%而實際上干細胞的比例只有0.16%。
另外回答樓主為什么懸浮培養(yǎng)如此重要:
體外培養(yǎng)中,越原始的細胞的代謝要求越低,所以成熟的有功能細胞反而難以維持,培養(yǎng)干細胞首先要篩選出干細胞,而神經(jīng)干細胞和前體細胞只要給予一定的因子刺激就能在無血清培養(yǎng)基中增殖,而大多數(shù)原代的成熟細胞不行。單層貼壁培養(yǎng)也有不少人嘗試,也是基于同樣的原則,但是方法上都不如懸浮來的成熟。
我覺得不是說神經(jīng)干細胞一定要懸浮培養(yǎng),而是神經(jīng)干細胞培養(yǎng)時,不經(jīng)過特殊處理,是不會貼壁生長的??赡苓@就是神經(jīng)干細胞的體外培養(yǎng)特性,原因可能是其不會分泌黏附介質(zhì)。
樓主所說的神經(jīng)干細胞貼壁生長時,我覺得此時已不是單純的神經(jīng)干細胞,而是有一部分已經(jīng)分化為了其它種類的細胞,而其它種類的細胞會分泌一些黏附介質(zhì),促使神經(jīng)球黏附生長。
所以說,如果需要單純的神經(jīng)干細胞,還是要懸浮培養(yǎng),如果需要研究其分化特性,就要使其貼壁生長了。
其實,現(xiàn)在對于神經(jīng)干細胞的確切定義目前還是有些模糊的,像在國內(nèi)很多人對stem cell 和progenitor cell 好像統(tǒng)稱為干細胞,其實兩者在很多方面還是有差異的:增殖能力,細胞漿表達蛋白,膜受體蛋白,離子通道...
記得很久以前在干細胞討論版塊有個帖子中提到:干細胞要稱之為干細胞,還有一個zui關(guān)鍵的特點就是:體外擴增后的細胞重新輸注體內(nèi)后,除了能分化為特定的神經(jīng)細胞外,還必須具有一定的可檢測的功能(好像是冷泉港實驗室提出的這個觀點)
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