For Research Use Only

僅供研究用
貨號：QYS-234088
山梨醇含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

山梨醇含量試劑盒說明書正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

山梨醇廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是糖運輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測山梨醇含量變化。
測定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍色絡(luò)合物，在 655nm 波長有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 3.5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3.5mL×1 瓶 ，4℃保存。
山梨醇的提取：

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液待測。
山梨醇含量試劑盒說明書測定步驟

1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 655nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

試劑（μL）    空白管    測定管
試劑一    35    35
試劑二    35    35
樣本        230
蒸餾水    230    

混勻后室溫靜置 15min，8000g，25℃離心 10min，取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96 孔板中，測 655nm 下吸光值 A，計算 ΔA=A 測定管-A 空白管?？瞻坠苤灰鲆还?。
山梨醇含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.352x - 0.002；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照樣品質(zhì)量計算山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W 3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g

山梨醇含量試劑盒說明書b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.176x - 0.002；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照樣品質(zhì)量計算山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本質(zhì)量，g

注意：zui低檢測限為 1μg/g 鮮重或 0.01μg /mg prot