植物RNA提取試劑盒的操作步驟

背景

植物RNA提取試劑盒用于從各種植物中提取純化高品質(zhì)總RNA，也適用于真菌菌絲RNA的提取。獨(dú)-特的Shredder分離柱，用于勻質(zhì)化和過(guò)濾高粘度的植物或真菌裂解物，同時(shí)采用硅基質(zhì)膜吸附RNA進(jìn)行純化，使多聚糖等各種污染物通過(guò)洗滌被有效去除，經(jīng)洗脫的RNA可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。由本試劑盒提取RNA分子量大于200堿基，純度高，幾乎無(wú)DNA殘留。如果是對(duì)微量DNA非常敏感的RNA實(shí)驗(yàn)，殘留的DNA可利用無(wú)RNase的DNase在柱上進(jìn)行消化去除。提取的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot、RT-PCR和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

植物RNA提取試劑盒

操作步驟：

1、50-100 mg植物組織在液氮中迅速研磨成粉末，加入600μl Buffer RL(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇)或Buffer RLC。渦旋振蕩使其充分裂解。

2、將步驟1所得全部液體轉(zhuǎn)移至已裝入收集管的過(guò)濾柱中，12000rpm(~～13400×g)離心2分鐘，將收集管中的上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管(自備)中。

3、在步驟2所得干凈的裂解液中加入0.5倍體積的無(wú)水乙醇，迅速混勻。

注意：加入乙醇后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，但不影響后續(xù)試驗(yàn)。

4、將上步得到的溶液轉(zhuǎn)移到已裝入收集管的吸附柱中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請(qǐng)分兩次轉(zhuǎn)入;12000rpm離心15秒，棄掉廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

6、配制DNase I混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混勻，配制成終體積為80μl的反應(yīng)液。

7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I混合液，20-30℃孵育15分鐘。

8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm離心1分鐘，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇),12000rpm離心15秒,棄廢液。

10、重復(fù)步驟9。

11、將吸附柱放回收集管中，12000rpm離心1分鐘，將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干吸附柱中的無(wú)水乙醇。

12、將吸附柱裝入新的離心管中，向吸附膜的中間加入30-50μl RNase-Free Water，室溫放置1分鐘，12000rpm離心1分鐘，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。