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上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司

酶免試劑盒抗原抗體包被技術(shù)

時(shí)間:2015-7-13閱讀:1510
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    因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),酶免試劑盒抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被,其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。

    將抗原或抗體固定在固相載體上的過(guò)程稱為包被(coating)。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。

    載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面,酶免試劑盒其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大提高,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。

    例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、酶免試劑盒魚精蛋白等作預(yù)包被,也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。

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