一般說來，如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。人ELISA試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的，低于這個值因為與曲線是個“S"型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。
    ① 振蕩方式：振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
    ② 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團，不利于提取。
    3.在用有機溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，人ELISA試劑盒解決的方法有：①用細頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
    4.濃縮
    由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。
    濃縮方式：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
    注意：
    ① 在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
    ② 在吹樣本時，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
    ③ 樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。
    ④ 不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
    5.凈化
    經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。人ELISA試劑盒將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是液液分配法。