做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候你知道ELISA捕獲包被法檢測(cè)抗體原理和步驟嗎，上海豐壽生物科技有限公司來(lái)告訴你。

一、原理

捕獲包被法（亦稱(chēng)反向間接法）ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。以目前常用的IgM測(cè)定為例，因血清中針對(duì)某種抗原的特異性IgM和IgG同時(shí)存在，則后者可干擾IgM的測(cè)定。因此先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測(cè)定特異性IgM。IgM抗體的檢測(cè)用于傳染病的早期診斷中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后加入抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶標(biāo)記針對(duì)抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的早期診斷。類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）同樣能干擾捕獲包被法測(cè)定IgM抗體，導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。因此中和IgG的間接法近來(lái)頗受青睞，用這類(lèi)試劑檢測(cè)抗CMV IgGM和抗弓形蟲(chóng)IgM抗體已獲成功。

捕獲法測(cè)抗體的簡(jiǎn)要操作步驟：

1.特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性結(jié)合待測(cè)抗原的抗體固定于固相載體表面；

2.加入待測(cè)樣品，通過(guò)固定在載體表面的針對(duì)該抗原的抗體固定于載體表面；

3.加入特異性抗原以及針對(duì)該特異性抗原的酶標(biāo)抗體；

4.加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。

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