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elisa試劑盒比賽法可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原比賽與固相抗體結(jié)合,因而結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量成反比。
elisa試劑盒原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為根底,將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可經(jīng)過(guò)洗刷除去多余的游離反應(yīng)物,然后保證實(shí)驗(yàn)成果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)踐使用中,經(jīng)過(guò)不同的設(shè)計(jì),具體的方法過(guò)程可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法(圖a)、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原比賽法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
elisa試劑盒操作過(guò)程如下:
(1)將特異抗體與固相載體聯(lián)接,形成固相抗體。洗刷。
(2)待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以相同的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合,比賽性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì),使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量削減。參閱管中只加酶標(biāo)抗原,保溫后,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)zui充沛的量。洗刷。
(3)加底物顯色:參閱管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原zui多,故色彩zui深。參閱管色彩深度與待測(cè)管色彩深度之差,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管色彩越淡,表示標(biāo)本中抗原含量越多。
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