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當(dāng)前位置:上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>上海豐壽告訴您:動(dòng)物血清的使用指南
血清在細(xì)胞培養(yǎng)中為細(xì)胞供給氨基酸,蛋白質(zhì),維生素(特別是脂溶性維生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,成長(zhǎng)因子,礦物質(zhì)及微量元素。此外,血清還能夠緩沖培養(yǎng)基,抑制蛋白水解酶,添加培養(yǎng)基的粘度,降低在移液或拌和時(shí)造成的剪切力。
關(guān)于動(dòng)物血清的正確使用,這兒做一個(gè)簡(jiǎn)略的說(shuō)明。
1、貯存
血清的保質(zhì)期是5年,貯存溫度-10 ~ -30℃。
血清長(zhǎng)時(shí)間貯存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)或許聚集而構(gòu)成沉積或可見(jiàn)的混濁。因此,長(zhǎng)時(shí)間保存血清有必要在-10℃以下貯存,并避免重復(fù)凍融。
2、熱滅活處理
通常不運(yùn)用熱滅活血清,除非某些特定的細(xì)胞系特別需求。熱滅活會(huì)降低或破壞血清中的成長(zhǎng)因子,影響某些細(xì)胞的成長(zhǎng)。
熱滅活zui初是為了滅活補(bǔ)體及支原體?,F(xiàn)在,假如血清中呈現(xiàn)支原體,能夠經(jīng)過(guò)過(guò)濾去除;而去除補(bǔ)體通常是不必要的,除非是在預(yù)備或檢測(cè)病毒或細(xì)胞毒性試驗(yàn)時(shí)。有研究顯示,血清37℃孵育就能夠滅活血清中熱不穩(wěn)定的補(bǔ)體成分,只要很少一部分細(xì)胞在這種滅活血清中成長(zhǎng)得更好,如胚胎干細(xì)胞和許多昆蟲細(xì)胞。
1)按正確操作凍結(jié)血清,恢復(fù)室溫。
2)水浴56℃提前預(yù)熱。
3)將預(yù)備好的血清和裝有相同體積水的燒杯一起放入水浴鍋,當(dāng)燒杯中的溫度計(jì)指示達(dá)到56℃時(shí)開(kāi)端計(jì)時(shí),滅活30min后結(jié)束,整個(gè)過(guò)程中需求隨時(shí)搖晃混勻。
3、渾濁和沉積
所有的血清或許保存一些纖維蛋白原。某些外部要素或許引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白,導(dǎo)致血清凍結(jié)后或許會(huì)觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會(huì)改動(dòng)血清的性能。
假如想去除這些絮狀沉積物,能夠?qū)⒀宸盅b到無(wú)菌離心管中,以低速離心1~2min,上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)運(yùn)用。
留意:不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉積物,由于這或許阻塞濾膜。
4、凍結(jié)
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但有必要留意的是,融解過(guò)程中有必要規(guī)則地?fù)u晃均勻。
假如在37℃或更高的溫度凍結(jié)血清,血清中會(huì)呈現(xiàn)沉積。此沉積或許包含磷酸鈣結(jié)晶,但不改動(dòng)血清的性能,相同血清熱滅活也會(huì)導(dǎo)致沉積的構(gòu)成。
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