1.基本原理 

將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細(xì)菌的過程稱為轉(zhuǎn)化（ Transformation ）。此感受態(tài)細(xì)菌細(xì)胞在 CaCl 2 低滲溶液中脹大為球狀（感受態(tài)細(xì)菌的制備，見前）。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 構(gòu)成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細(xì)菌表面，經(jīng) 42℃ 短時刻熱沖擊處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培育基上生長數(shù)小時后，球狀細(xì)胞恢復(fù)并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，外源基因得到表達(dá)。在選擇性培育平板上，可選出所需的轉(zhuǎn)化子（即含有質(zhì)粒 DNA 的細(xì)菌）。鈣處理的感受態(tài)細(xì)胞，一般每微克 DNA 能取得 10 5 ～ 10 6 個轉(zhuǎn)化子。除化學(xué)辦法轉(zhuǎn)化細(xì)菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉(zhuǎn)化率可高達(dá) 10 9 ～ 10 10 個轉(zhuǎn)化子 /μg 質(zhì)粒 DNA 。

2.器材 

①培育皿  ②恒溫培育箱

3.試劑 

① LB 培育基

②選擇性 LB 瓊脂培育平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

③氨芐青霉素 100 mg/ml

④宿主細(xì)菌：經(jīng) 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態(tài)細(xì)菌 DH5α

4.操作過程 

①取 50 μL 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，參加適量質(zhì)粒（體積不得超過 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 熱激 90 s ，馬上放回冰上，冰浴 2 min ；

②加 400 μL LB 培育基，于 37℃ 搖床慢搖振動培育 45-60 min ；

③取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固體培育基上， 37℃ 倒置培育過夜。

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