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公司動態(tài)

怎么挑選到適合自己試驗(yàn)的抗體

閱讀:360發(fā)布時(shí)間:2017-11-20

我司產(chǎn)品價(jià)格優(yōu)、質(zhì)量好、品種多,我司主營產(chǎn)品有血清、染色液、規(guī)范品、ELISA試劑盒、層析色譜填料等,如需訂購,可電聯(lián)我司出售。注:本公司產(chǎn)品僅供科研運(yùn)用!
一、關(guān)于特異性的選擇:特異性的選擇首要需求考慮四個(gè)方面:蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、符號物的特異性。
1、ELISA試劑盒蛋白特異性:針對需求檢測的蛋白查找抗體,幾個(gè)細(xì)節(jié)要差異,重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測,對抗體的要求是不一樣的,留心查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不是全長表達(dá),則需求留心抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方法,特別表型的蛋白需求進(jìn)行序列比對,并結(jié)合抗體免疫原序列,查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測需求判定具體位點(diǎn),不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在,不宜相提并論。
2、種屬特異性:同種蛋白不同物種,有著或大或小的差異?,F(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的,根據(jù)蛋白的同源性的情況與其他種屬發(fā)作交叉反應(yīng)。需求參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體,可以通過蛋白的序列比對,選擇同源序列免疫的抗體,不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴,如果可以申請到免費(fèi)的抗體樣品,則利于抗體選擇。
3、實(shí)驗(yàn)方法特異性:現(xiàn)在運(yùn)用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有許多,不同的運(yùn)用方法過程中,因?yàn)閷Φ鞍讟悠返奶幚矸椒ú灰粯?,蛋白的含量有差異,對抗體的辨認(rèn)表位和效價(jià)要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的檢測,現(xiàn)在檢測比較多的只是WB、IHC、IF等,如果針對具體的實(shí)驗(yàn)方法沒有找到適宜的抗體的,可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息,選擇盡可能有效果的抗體。相同,申請到免費(fèi)的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。
4、符號物的特異性一般根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會運(yùn)用帶有符號的一抗,比如WB、IHC等,都是通過二抗類的試劑符號抵達(dá)效果呈現(xiàn)的目的。但是根據(jù)儀器分析的一些實(shí)驗(yàn),可能就會運(yùn)用到直接符號的一抗,比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需求了解到自己行將運(yùn)用的儀器能檢測到的熒光規(guī)劃,不通的參數(shù)要求選擇對應(yīng)的符號物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,需求選配不同的熒光物。
二、抗體種屬來歷的選擇:有人認(rèn)為單抗比多抗好,其實(shí)這并不是一個(gè)謹(jǐn)慎的觀念,只能說在可能性上單抗的特異性更好一些,而多抗的親和力會優(yōu)于單抗,而且特異性并不必定就遜于單抗,首要看抗原的規(guī)劃水平?,F(xiàn)在商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗,多抗首要是兔多抗、山羊多抗等,其他種屬來歷抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好仍是多抗好,能做出實(shí)驗(yàn)的抗體就是好抗體。在選擇上一般建議實(shí)驗(yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好,不宜同源??贵w不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中,需求在差異于實(shí)驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上,差異開兩個(gè)方針的抗體種屬來歷,以便于二抗差異辨認(rèn)。
三、關(guān)于性價(jià)比的選擇:抗體的質(zhì)量凹凸畢竟仍是需求通過實(shí)驗(yàn)效果來呈現(xiàn)的,但是在選擇抗體之前我們并無法判別抗體的效果怎么。不管什么品牌的,不管進(jìn)口仍是國產(chǎn)的,都會有用得不錯(cuò)的產(chǎn)品,也都會有做不出來的產(chǎn)品??贵w歸于異質(zhì)化產(chǎn)品,不同品牌之間,甚至同一品牌的不同產(chǎn)品之間,抗體質(zhì)量差異都較為顯著,而且沒有共同的衡量規(guī)范。這是抗體選擇中zui難的一個(gè)問題。許多人習(xí)慣于根據(jù)實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)認(rèn)識或參考文獻(xiàn)上運(yùn)用的產(chǎn)品進(jìn)行選擇,但是因?yàn)椴煌伍g的抗體效果也是有差異的,所以并不能*確保正確選擇。在這種情況下,抗體的售后就尤為重要,遇到抗體質(zhì)量阻礙時(shí),可以確保有效地解決問題,不至于影響實(shí)驗(yàn)的開展?,F(xiàn)在有部分品牌可以供應(yīng)免費(fèi)的抗體小樣的,無疑對這個(gè)問題是一個(gè)很好的解決方案。先判定抗體是否適宜自己的實(shí)驗(yàn),可以避免因?yàn)榭贵w質(zhì)量投訴耽誤實(shí)驗(yàn)安排。在價(jià)格方面,需求謹(jǐn)記,zui貴的不必定就是的,zui適宜你的實(shí)驗(yàn)的才是的?;ㄔS多錢買到很貴的抗體,再花上很長的時(shí)刻去投訴的情況并不稀有。只買對的,不買貴的。在選擇價(jià)格的時(shí)分還要留心規(guī)范巨細(xì)、抗體濃度、效價(jià)規(guī)劃等,要?dú)w納考慮。在規(guī)范方面,根據(jù)畢竟可以稀釋成的作業(yè)液的量的來衡量更為。許多老品牌供應(yīng)的抗體產(chǎn)品根本都是以大包裝為主,就單個(gè)課題的實(shí)驗(yàn)而言,過大的包裝有時(shí)會形成很大的?,F(xiàn)在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體,這在必定程度上給選擇者更大的選擇自由度,可以根據(jù)運(yùn)用產(chǎn)品的效價(jià),計(jì)算出自己實(shí)踐需求的抗體量,做到精判定量采購。
四、關(guān)于品牌的選擇:因?yàn)榭贵w質(zhì)量的異質(zhì)化,關(guān)于抗體的品牌選擇就被我們所重視,但是不管是什么品牌都難免會遇到不適宜自己實(shí)驗(yàn)的抗體。所以一般建議考慮那些業(yè)界廣泛認(rèn)可、購買便當(dāng)、專業(yè)、售后處理方便的品牌。一些甚至都沒有正式署理的,只能備選。一同購買時(shí)必定要找可以供應(yīng)產(chǎn)品教導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)分析、售后處理的正規(guī)署理商購買,避免因?yàn)橘I到假貨水貨影響實(shí)驗(yàn)。
五、ELISA試劑盒關(guān)于其他一些小細(xì)節(jié):抗體選擇與運(yùn)用過程中,多少還會遇到一些意想不到的作業(yè)。有些細(xì)節(jié),仍是需求多留心一些。如在選擇做阻斷或中和實(shí)驗(yàn)時(shí),有時(shí)需求將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中,這是需求留心抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體,進(jìn)行分裝是比較節(jié)省的方法,如果是價(jià)的,可以配成母液再分裝。抗體的短時(shí)刻運(yùn)送,用一般冰塊堅(jiān)持溫度是可以滿足要求的。其他不要糾結(jié)于WB過程中分子量的問題。許多時(shí)分,我們看到相同的抗體,不同的品牌,甚至同一品牌不同的貨號,標(biāo)示的分子量都不一樣。其實(shí)可能只是生產(chǎn)商只檢測時(shí)運(yùn)用了不同的種屬不同的樣品類型,或是參照了不同的文獻(xiàn),對運(yùn)用者來說,相同的樣品,不管運(yùn)用哪個(gè)品牌的,只需抗體是對的,目的條帶只會呈現(xiàn)在相同的方位。關(guān)于分子量的問題,一般不建議看產(chǎn)品說明,WB中條帶的方位由樣品決議,并不會因?yàn)榭贵w不同而不同。所以在檢測蛋白之前,我們可以通過數(shù)據(jù)庫或參考文獻(xiàn),對行將檢測的蛋白做個(gè)比較全面的了解,包括其可能剪切與修飾的情況、表型的情況等。在*次運(yùn)用一個(gè)新的抗體時(shí),不要根據(jù)分子量橫向剪膜,可以保存幾個(gè)全泳道,看看條帶方位或分布的情況。

 


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