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技術(shù)文章

核酸提取——RNA提取與DNA的提取

閱讀:1086發(fā)布時間:2015-8-31

核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數(shù)萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。

核糖核酸,存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤、G*、C胞嘧啶、U*,其中,U(*)取代了DNA中的T。

脫氧核糖核酸又稱去氧核糖核酸,是一種生物大分子,可組成遺傳指令,引導(dǎo)生物發(fā)育與生命機能運作。主要功能是信息儲存,可比喻為藍(lán)圖"食譜"。其中包含的指令,是建構(gòu)細(xì)胞內(nèi)其他的化合物,如蛋白質(zhì)與核糖核酸所需。帶有蛋白質(zhì)編碼的DNA片段稱為基因。其他的DNA序列,有些直接以本身構(gòu)造發(fā)揮作用,有些則參與調(diào)控遺傳信息的表現(xiàn)。

RNA的提取

RNA的提取,通常是用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織做均漿并反復(fù)提取細(xì)胞質(zhì)中的核糖核蛋白,而留下含有DNA的細(xì)胞核物質(zhì),然后用10%醋酸調(diào)至pH值為4.2時,產(chǎn)生沉淀,離心,棄去上清液,先用0.5mol/L氯化鈉溶液,后用水洗滌沉淀,將核糖核蛋白溶解于0.5mol/L*溶液中,離心在取上清液,調(diào)節(jié)pH值為4.2的沉淀,沉淀用0.5mol/L氯化鈉溶液洗滌,再一次除去脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質(zhì)可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在*水溶液中,加入乙醇,RNA即以鈉鹽形式沉淀出來。

DNA的提取

DNA主要存在于細(xì)胞核中,天然狀態(tài)的DNA絕大多數(shù)是以脫氧核糖核蛋白形式存在的。從人體細(xì)胞中提取DNA時,一般先獲得脫氧核糖核蛋白,再將蛋白質(zhì)除去,從中分離DNA。常用的方法是以1mol/L氯化鈉溶液抽提,得到的脫氧核糖核蛋白溶液與含有少量辛酸或戊酸的氯仿一起振蕩,除去蛋白質(zhì);或者在組織細(xì)胞破碎后以低濃度0.14mol/L氯化鈉溶液反復(fù)洗滌除去核糖核蛋白,再以1mol/L氯化鈉抽提脫氧核糖核蛋白,提取是用氯仿-戊酸抽提法除去蛋白質(zhì)。兩種方法比較,后一種方法使核酸降解可能少一些。以稀鹽溶液提取DNA時,加入適量去污劑更有助于蛋白質(zhì)與DNA的分離。


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