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技術(shù)文章

土壤β-葡萄糖苷酶試劑盒說明書

閱讀:1489發(fā)布時間:2016-9-7

土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)試劑盒說明書

 

分光光度法 50 管/24 樣

 

測定意義:

 

S-β-GC 能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。

測定原理:

 

S-β-GC 能夠催化對-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成對-硝基*,后者在 400nm 有特征光吸收。

自備用品:

 

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、甲苯和蒸餾水。

試劑組成和配制:

 

試劑一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

 

試劑二:粉劑×2 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 10mL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;試劑三:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;

 

試劑四:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

 

測定步驟:

 

試劑名稱

測定管

 

對照管

 

 

 

 

風干土樣(g

0.05

 

0.05

 

 

 

 

試劑一(μL

25

 

25

 

 

 

 

振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置 15min

 

 

 

 

 

試劑二(μL

400

 

 

 

 

 

 

試劑三(μL

500

 

500

 

 

 

 

 

混勻, 37℃水浴 1h 后,立即沸水浴煮沸 5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻

 

試劑二(μL

 

 

400

充分混勻,10000g 常溫離心 10min,取上清液

 

上清液(μL

500

 

500

試劑四(μL

1000

 

1000

 

充分混勻,室溫靜置 2min 后,400nm 處蒸餾水調(diào)零,測定吸光值 A,計算ΔA=A 測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

 

S-β-GC 活力計算:

 

標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0032x -0.0027x 為標準品濃度(μmol/L),y 為吸光值。單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1 μmol 對-硝基*定義為一個酶活力單位。

S-β-GC 活力(U /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反總÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反應(yīng)時間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:9.25×10-4 LW:樣本質(zhì)量,0.05g。


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