流式細胞術(shù)在免疫研究中的多功能特點
單激光光源 儀器安裝一個激光器，一般以氬離子型為主有效光譜為488nm和515nm，適用激發(fā)異硫氰酸熒光素（FITC）；亦可激發(fā)異硫氰酸四甲基洛他明（Tetramethylrho-damine isothiocynate，TROTC）但效果不甚理想。合適的光源應是氪離子激光，它的激發(fā)光譜531nm和856nm，也適用于Rhodamine 類衍生物XRITC。細胞用一種熒光染料標記的抗體染色，稱為單標記染色；亦可用雙標記染色，即用兩種不同發(fā)射波長的熒光染料分別標記兩種抗體，同時針對一群細胞表面的兩種抗原進行測定。三標記染色是3種染料標記3種抗體同時對細胞著染，即FITC和藻紅蛋白（Phyco-erithrin，PE）標記抗體同F(xiàn)luorescent tandem結(jié)合物公用（R-phycoerythrin，加Texas red做為一種Duo CHROME）。近年新發(fā)展一種非熒光標記法：免疫膠體金標記，它可以補充熒光染料因光譜互相重疊而使檢測范圍受限的不足。方法是利用膠體金顆粒直接標記抗體，細胞染色后用623nm波長激發(fā)，90℃散射光提供信號。金標記的細胞活性不受影響，可分選并用于增殖性實驗。
雙激光光源 應用雙激光光源的儀器擴大了其分辨的標記信號范圍和種類。根據(jù)光的波長有兩種配合方式：一是紫外光和可見光波長配合，兩個激光器分別發(fā)射可見光及紫外光其zui大特點是同時做細胞DNA含量和細胞表面標記的測定，研究活細胞周期活動中的免疫現(xiàn)象。同時，還可用Hoechat 33342在一定濃度下穿透細胞膜速率不同的特點，區(qū)別不同細胞類型，鑒別不同分化階段的細胞等。另一種是染料激光光源配合，是在較大功率的激光束中加一熒光染料器，使它發(fā)出特殊染料需要的激發(fā)光波長，以增加測定范圍，近年由于染料的發(fā)展，已很少用此技術(shù)。
熒光偏振技術(shù) 是在儀器上裝備特殊的偏振光濾片，發(fā)出的偏振激光對大分子及細胞結(jié)構(gòu)和構(gòu)象的改變異常敏感。它可測定伴隨細胞轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的早期免疫及生化改變。如膜的流動性、細胞骨架成分、DNA構(gòu)象的變化等，可以提供敏感的早期有價值的信息。
分選（Sorting）和自動克隆技術(shù) 目前通用的流式細胞計zui大的優(yōu)點是可以對細胞群體進行分選和細胞克隆化。其原理是在樣品噴射成液流、一系列液滴形成的過程中，這些液滴帶上電荷，細胞被包在一個帶電的液滴內(nèi)。在強大的電場作用下，從主流束中偏向一側(cè)，通過帶電的水滴及電場控制，把偏離的液滴收集于試管內(nèi)、玻片上或定量收集于96孔培養(yǎng)板上，后者即為自動克隆化技術(shù)。這一切都可根據(jù)研究人員的需要，在儀器的顯示屏上確定要分選的細胞群體。每次可分選兩群細胞，隨著技術(shù)的進步，分選量也越來越大。
