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上海研域儀器設(shè)備有限公司

如何做好ELISA試劑盒標(biāo)準曲線

時間:2015-9-11閱讀:240
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許多ELISA試劑盒檢測都涉及到標(biāo)準曲線的問題,標(biāo)準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實驗的成敗,那么究竟如何繪制或制作標(biāo)準曲線呢?
做標(biāo)準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準曲線計算出來的,所以首先要把做標(biāo)準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準曲線樣品的標(biāo)準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準曲線中的標(biāo)準樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測標(biāo)準樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
5、標(biāo)準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
6、做出的標(biāo)準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎?,但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999.

·ELISA試劑盒評價的方法
1.發(fā)質(zhì)控物進行調(diào)查,這是目前國內(nèi)外常見的形式,采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實驗室,各實驗室在規(guī)定的日期進行檢驗,并將結(jié)果報至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計分析,再將評價結(jié)果寄回實驗室,使其了解工作質(zhì)量,發(fā)現(xiàn)問題,提高質(zhì)量。其缺點為由于各實驗室吃小灶或互相打修改結(jié)果而達不到真正評價作用。
2.現(xiàn)場調(diào)查,事先不通知,臨時派出人員到各實驗室,規(guī)定采用常規(guī)方法,檢測一組標(biāo)本,進行評價。這種方法可以解決實際問題,進行現(xiàn)場指導(dǎo),組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進行。

·ELISA試劑盒實驗記錄
1.所有實驗的原始資料均應(yīng)存檔;
2.所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊;
3.原始登記表應(yīng)記錄試劑來源、批號;
4.質(zhì)控血清的來源及測定值并注明是否在控;
5.簽上實驗者姓名及審核者姓名。

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