液相色譜法(HPLC)是目前應(yīng)用廣泛的分離、分析、純化有機(jī)化合物(包括能通過化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)化合物的無機(jī)物)的有效方法之一。
該設(shè)備利用液體作流動(dòng)相對(duì)高沸點(diǎn)化合物、熱不穩(wěn)定化合物、大分子化合物、高聚物、生物制品等有很好的分離效果。適用于低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物、大分子化合物、生物制品的分離，同時(shí)可為紅外、核磁、質(zhì)譜等結(jié)構(gòu)分析儀器提供純化樣品，在有機(jī)合成、化工分析、天然產(chǎn)物分析、生化、醫(yī)藥、環(huán)境科學(xué)、食品科學(xué)等諸多方面得到了廣泛的應(yīng)用。
在已知的有機(jī)化合物中，約有80%能用液相色譜法分離、分析，而且由于此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點(diǎn)、難氣化揮發(fā)、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物和生命物質(zhì)。
液相色譜法操作流程
1、開機(jī)：依次打開脫氣機(jī)、色譜泵、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)電源；待各設(shè)備自檢正常后，啟動(dòng)色譜管理系統(tǒng)。
2、流動(dòng)相準(zhǔn)備：過濾，脫氣。
3、色譜泵排氣
4、安裝色譜柱
5、平衡流動(dòng)相(有機(jī)溶劑與緩沖鹽溶液切換時(shí)等易產(chǎn)生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動(dòng)相沖洗系統(tǒng))
6、數(shù)據(jù)采集、進(jìn)樣
7、沖洗管路及色譜柱
8、數(shù)據(jù)處理
9、關(guān)機(jī)
10、記錄相關(guān)信息
對(duì)檢測(cè)器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對(duì)溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差檢測(cè)器等。
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