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近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA試劑盒配置方法如下:ELISA試劑盒實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑盒以及各種溶液如何配置?(1) ELISA試劑盒實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2)ELISA試劑盒實驗洗滌緩沖液(3) ELISA試劑盒實驗稀釋液;(4)ELISA試劑盒實驗終止液(5)ELISA試劑盒底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISA試劑盒。ELISA試劑盒的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
1、ELISA試劑盒實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑"的作用。
4、蔗糖溶液一般在ELISA試劑盒板子經(jīng)過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結合了。
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