實驗方法原理
FOLIN 酚法所用的試劑有兩部分組成。試劑甲可與蛋白質(zhì)中的肽鍵起顯色反應(yīng), 試劑乙在堿性條件下極不穩(wěn)定, 易被酚類化合物還原成藍(lán)色(蛋白質(zhì)中的酚基將磷鉬酸-磷鎢酸還原成藍(lán)色復(fù)合物)。在一定條件下, 藍(lán)色強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的量成正比, 范圍約在25～250 μg/ ml 蛋白質(zhì)濃度。
實驗材料 蛋白質(zhì)
試劑、試劑盒 碳酸鈉氫氧化鈉硫酸銅酒石酸鈉鎢酸鈉鉬酸鈉蒸餾水磷酸濃鹽酸硫酸鋰液體溴*
儀器、耗材 722S 型分光光度計電子天平離心機(jī)容量瓶試管 吸管
實驗步驟
1. 樣品的制備
用臺秤稱取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾缽 碾成勻漿, 加水30 ml , 繼續(xù)碾10 min , 倒入離心管中, 另加5 ml 水將剩余物洗進(jìn)離心管, 平衡后于1000 r/ min 離心15 min , 取上 清10 ml 定容到100 ml , 待測。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作與樣品測定
按下表操作， A . FOLIN 酚法 B . 考馬斯亮藍(lán)法
(標(biāo): 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液, F : FOLIN 試劑: K: 考馬斯亮藍(lán) G250 試劑。自己制備的蛋白質(zhì)溶液測定含量時注意稀釋度)
收起
注意事項
1. 蛋白質(zhì)樣品和呈色劑都不應(yīng)有沉淀, 有沉淀應(yīng)過濾除去。
2. 染料與蛋白質(zhì)結(jié)合后, 形成的藍(lán)色復(fù)合物易輕度沾附試 管壁或比色皿, 每次使用不能用有著色的比色皿。使用完后應(yīng)立 即清洗干靜。
