G418通過干擾核糖體的功能而阻斷細胞的蛋白合成
G418 G418是一種氨基糖苷類抗生素 ,這種氨基糖類抗生素的結(jié)構(gòu)和*、*、*相似，在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的抗性篩選試劑。它通過抑制轉(zhuǎn)座子Tn601，Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細胞產(chǎn)生毒素 ,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進真核細胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為ｍＲＮＡ ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有Ｇ418的選擇性培養(yǎng)基中生長。Ｇ418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應(yīng)用。
使用方法 室溫下運輸, 干粉在室溫下儲存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃儲存 由于各真核細胞系對敏感度不同,各新細胞系或株穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時殺死非穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞所需用量需要通過實驗優(yōu)化。zui適用量通過建立細胞死亡曲線獲得。將細胞稀釋至1000cell/ml，每孔100ul加入有培養(yǎng)基的24孔板，將每孔中的濃度稀釋至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12個級別, 培養(yǎng)10-14天，以zui低細胞全部死亡濃度為基準(zhǔn)，一般400-800左右，篩選時比該濃度再高一個級別，維持時使用篩選濃度的一半即可。
選擇濃度范圍
細胞系或機體 濃度（ug/ml）
中國倉鼠卵巢細胞 700～800
Madin－Darby犬腎細胞 500
人上皮A431細胞 400
猿CV-1細胞 500
盤基網(wǎng)柄菌屬 10～35
植物 10
酵母 125～500
質(zhì)量指標(biāo) ：白色粉末，融點138～144℃，溶于水、甲醇。 CAS No.：108321-42-2
分子式 ：C20H40N4O10 •2H2SO4 分子量 ：692.71
結(jié)構(gòu)式 ：
比旋：+104o～+121o 水分：≤10% 吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)
效價： >700 ug/mg
[儲運] 室溫下運輸, 干粉在室溫下儲存，溶液于-20℃儲存。
