1.脾克隆形成法

    該方法是人類認(rèn)識(shí)HSCzui早的方法，主要用于評(píng)估小鼠的HSC:將小鼠的骨髓或脾細(xì)胞注射到經(jīng)放射線照射過(guò)的小鼠體內(nèi)，通過(guò)觀察CFU-S的數(shù)量和種類來(lái)推知HSC。這種方法不能用于測(cè)量人類HSC，僅適合于有關(guān)小鼠造血調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究。

2.外克隆形成法

    將造血細(xì)胞注入到半固體培養(yǎng)基中，在一定條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，根據(jù)克隆形成的數(shù)量、克隆細(xì)胞的構(gòu)成來(lái)分析克隆的起源和克隆形成細(xì)胞的性質(zhì)，即稱為體外克隆形成法。向培養(yǎng)基中加入各種造血生長(zhǎng)因子，不論在人還是在小鼠均可培養(yǎng)出含有各類血液細(xì)胞的混合集落(如CFU-M-ⅹ、CFU-GEMM)，常常以其數(shù)量代表HSC的多少。但現(xiàn)在認(rèn)為，形成混合集落的細(xì)胞大部分為多潛能造血祖細(xì)胞而不是HSC。HSCT時(shí)常用CFU-GM計(jì)數(shù)作為植入干細(xì)胞數(shù)的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，它代表的是粒-單祖細(xì)胞的數(shù)量。因此，現(xiàn)將它作為造血祖細(xì)胞的一種檢測(cè)方法。

    原始細(xì)胞集落形成細(xì)胞(CFU-blast)是目前在體外所能鑒別出的zui未分化的克隆形成細(xì)胞。這種集落由未分化的原始細(xì)胞組成。二次集落試驗(yàn)證實(shí)它可形成較多的原始細(xì)胞集落和混合集落，同時(shí)這種細(xì)胞還具有向淋巴細(xì)胞分化的能力，因此人們推測(cè)這種細(xì)胞非常接近于HSC。人類的這種集落培養(yǎng)條件相當(dāng)苛刻，一般多用于小鼠的造血細(xì)胞研究。

3.長(zhǎng)期培養(yǎng)啟動(dòng)細(xì)胞檢測(cè)法

    將造血細(xì)胞放在骨髓基質(zhì)上培養(yǎng)，在zui初1～2周可發(fā)現(xiàn)有克隆形成細(xì)胞(CFC)的增殖，其后逐漸消失，這些細(xì)胞一般認(rèn)為其來(lái)源于造血祖細(xì)胞。但培養(yǎng)5周以后，在培養(yǎng)細(xì)胞中仍有克隆形成細(xì)胞的存在，它們則來(lái)源于更為早期的未分化造血細(xì)胞，被稱為長(zhǎng)期培養(yǎng)啟動(dòng)細(xì)胞(long-term cultuteinitiaing cel1，LTC-IC)。LTC-IC的定量可以采用極限稀釋培養(yǎng)法來(lái)測(cè)定，此法常用于測(cè)定人類的HSC。據(jù)報(bào)道，在105個(gè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞中，以LTC-IC分析法所示的原始干細(xì)胞約為10個(gè)左右。

4.造血干細(xì)胞的移植實(shí)驗(yàn)法

    這是一種體內(nèi) HSC測(cè)量方法。該方法雖不能像體外實(shí)驗(yàn)可以進(jìn)行定量研究，但在評(píng)估造血細(xì)胞的長(zhǎng)期造血重建能力方面具有較高的應(yīng)用價(jià)值，是目前檢測(cè)HSC自我更新和多向分化能力的主要方法。研究人的HSC只能做異種移植，而為克服異種移植間的免疫排斥問(wèn)題，實(shí)際應(yīng)用中多是選擇羊胎兒(羊子宮內(nèi)胎羊移植系統(tǒng))或具有免疫功能不全的小鼠(如SCID/HU小鼠、NOD/SCID小鼠等)作為移植對(duì)象。

5.造血干細(xì)胞的流式細(xì)胞測(cè)量法

    流式細(xì)胞測(cè)量術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、能夠大量處理細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)，結(jié)合熒光標(biāo)記的單克隆抗體，可以對(duì)造血細(xì)胞群中的干/祖細(xì)胞進(jìn)行較為理想的識(shí)別及分選。但如前所述，在造血細(xì)胞的特征性表型未確定之前，難以通過(guò)表面標(biāo)記識(shí)別及分選真正的HSC。臨床上常以CD34十做為造血干/祖細(xì)胞的標(biāo)記。進(jìn)行HSCT時(shí)，既往多以CFU-GM產(chǎn)率作為評(píng)估輸入干細(xì)胞數(shù)量的指標(biāo)，現(xiàn)已有由CD34十細(xì)胞計(jì)數(shù)取代CFU-GM測(cè)定的趨勢(shì)。