DAB 顯色時間如何把握？
 
1.DAB 顯色時間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時間，到出現(xiàn)淺棕色本底時即可沖洗。
 
2.DAB 顯色時間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時間過長，需要下調(diào)抗體濃度或縮短抗體孵育時間。
 
3.若很短時間就出現(xiàn)背景很深，還有可能是你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長封閉時間。
 
4.DAB 顯色時間很長（如超過十幾分鐘）才出現(xiàn)陽性染色，一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時間過短（一抗 4oC 過夜）；另一方面就是封閉時間過長。
 
免疫組化結(jié)果如何分析？
 
1.陽性著色細胞計數(shù)法。在 40 * 光鏡下，隨機選擇不重疊的 10 個視野，人工或機器計數(shù)陽性著色細胞，每組 3-6 張不同動物組織切片，然后進行組間比較即可。
 
2.灰密度分析法。通過在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用 image j 進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可。
 
3.評分法。通過在光學顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0-3 分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進行評分（1-4 分為 0-25%、26-50%、51-75%、76-100%），zui終可以分數(shù)相加，再進行比較。
 
對于以上這幾種方法，各有利弊，請細心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。