(一)試驗原理

   將葡萄糖氧化生成CO2是脂肪組織或脂肪細(xì)胞代謝葡萄糖的主要方式之一。本實驗通過測定脂肪組織或脂肪細(xì)胞氧化生成CO2的量，以了解脂肪組織或細(xì)胞對葡萄糖的轉(zhuǎn)化能力。

(二)材料

1．待檢藥物進(jìn)行不同倍數(shù)稀釋。

2．陽性對照藥胰島素。

3．動物雄性Wistar大鼠，按需要分為若干實驗組和對照組。

4．試劑及配制

(1)溫孵液：NaCl 6，19 g，NaHC03 3．36g，CaCl20．1lg，KCl 0．37 g，MgCl20.10g，溶至1000ml蒸餾水中，pH調(diào)至7．4。取上述液體100ml，加明膠20mg、D葡萄糖316mg，通95％O2和5％CO2混合氣體。

(2)5 mol／L  H2S04、8 mol／L NaOH。

(3)U -14C一葡萄糖，用蒸餾水配制成148 kBq／ml。

(4)25％Triton、2，5一二苯基惡唑(2，5一diphenyl oxazolo，PPO)、1，4雙(5一苯基惡唑基-2一)苯[1，4一bis一(5 phenyl oxazol一2一y1)一benzene，POPOP]甲苯閃爍液，將PPO 5．0 g、POPOP 0．5 g溶解到800ml甲苯和200mlTriton X一100的混合溶液內(nèi)。

5．器材：37℃水浴箱、液閃儀、25ml燒瓶、帶中心玻璃小瓶的橡皮塞。

(三)實驗方法

1．制備標(biāo)本雄性Wistar大鼠，分為實驗組和對照組。實驗組大鼠給予腹腔注射胰島素或待測藥物，對照組大鼠腹腔注射生理鹽水，禁食12h后斷頭處死。取附睪脂肪墊遠(yuǎn)端部分100~200mg，稱重后剪碎。將對照組和實驗組脂肪組織分別置于對照瓶和測定管中。

2．對照管和測定管內(nèi)分別加入溫孵液1．9ml、組織樣品100~200 mg、U一14 C一葡萄糖0．1ml及5 mol／L H2SO4 0．25ml，混勻后，37℃(2水浴振蕩2h。

3．脂肪細(xì)胞對葡萄糖轉(zhuǎn)化的測定與脂肪細(xì)胞對葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)實驗類似，只是將組織樣品用細(xì)胞樣品(4×104／ml)1．9ml代替。

4．對照管和測定管內(nèi)分別加入1．8 mol／L NaOH 0．2ml(加到燒瓶*小瓶中)；37℃ 水浴振蕩2h后取出0．1ml，加到爍液瓶中；對照管和測定管內(nèi)分別加入20g Triton閃爍液10ml；放置過夜，用液閃儀計數(shù)。

(四)結(jié)果與分析

1．計算出脂肪組織轉(zhuǎn)化葡萄糖的能力。

2．計算出脂肪細(xì)胞氧化葡萄糖的能力 由測定管計數(shù)值減去對照管計數(shù)值和已知的U一14 C一葡萄糖的比活性計算氧化為14 C02的U一14 C一葡萄糖的量(μmol)，脂肪細(xì)胞氧化葡萄糖的能力以下式表示。