神經膠質細胞是廣泛分布于中樞神經系統(tǒng)內的，除了神經元以外的所有細胞。具有支持、滋養(yǎng)神經元的作用，也有吸收和調節(jié)某些活性物質的功能?？煞譃樯偻荒z質細胞(oligodendrocyyte)、星形膠質細胞(astrocyte)、施萬細胞和小膠質細胞四種。神經膠質細胞有分裂的能力，故可進行傳代培養(yǎng)。

少突膠質細胞的培養(yǎng)

    少突膠質細胞是中樞神經系統(tǒng)的髓鞘形成細胞，它起源于胚胎神經管的神經上皮細胞，隨著中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育，逐步遷移到白質，并增殖、分化，形成髓鞘包裹軸突。

1．材料

(1)材料來源：新生1周內SD大鼠的腦組織。

(2)手術器械：解剖剪、解剖鑷、眼科剪和*。

(3)培養(yǎng)皿和蓋玻片：用O．01％PLL包被蓋玻片，置溫箱中烘干，使用前放入培養(yǎng)皿中。

(4)分離液：將9ml Percoll原液和lml10×HBSS混合后，用lOml HBSS稀釋。

(5)消化液：1％*。

(6)培養(yǎng)液：DMEM／F12混合培養(yǎng)液，添加15％FBS、6g／L葡萄糖、10萬I U／L*和100mg／L*。

2．方法

(1)取材：通過頸動脈放血處死大鼠，無菌條件下取大腦，置人PBS液中，在解剖顯微鏡下剔除腦膜及血管，分離出大腦皮層。

(2)消化：將大腦皮層剪碎，加入1％*，37℃水浴中振蕩消化30min。加入2ml FBS終止消化，離心(1000r／min，10min)。

(3)細胞懸液制備：吸去上清液，用HBSS洗滌細胞2次，再用：100目濾器過濾。在濾液中加入HBSS，至20ml，制成細胞懸液。

(4)收集細胞：在50ml離心管中加入分離液，將10ml細胞懸液鋪在分離液的上面。在4℃條件下，離心(14000r／min，45min)。離心管中的液柱自上而下呈現(xiàn)三層，即髓鞘層、少突膠質細胞和星形膠質細胞層、紅細胞層。收集靠近髓鞘層的少突膠質細胞。用2倍體積的HBSS稀釋，離心(2000r／min，10min)。

(5)培養(yǎng)細胞：吸去上清液．用HBSS混懸細胞，離心(1000r／min，10min)。用培養(yǎng)液混懸沉淀細胞，使細胞充分分離，然后以1×106的密度接種于預先涂有多聚賴氨酸的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中，3d換液一次。

3．結果觀察培養(yǎng)的細胞中95％以上為少突膠質細胞。培養(yǎng)24h后，大部分少突膠質細胞已貼壁生長。少突膠質細胞的胞體較小，呈圓形或三角形。胞質少，核較大而圓，核仁不明顯。大多數(shù)細胞具有典型的雙極或三極突起，細胞突起短，分支較少。若在培養(yǎng)液中使用有絲分裂抑制劑，少突膠質細胞在體外培養(yǎng)可達2個月。可用半乳糖腦苷脂免疫細胞化學染色及髓鞘堿性蛋白免疫細胞化學染色等方法鑒定少突膠質細胞。

4．注意事項少突膠質細胞膜上半乳糖腦苷脂的出現(xiàn)與少突膠質細胞發(fā)育的狀態(tài)有關，如果培養(yǎng)物取材于出生前的胚胎神經細胞，則只有在體外培養(yǎng)7～lOd后才能表達半乳糖腦苷脂。