人巨噬細胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者*中分離，但操作煩瑣，得量不多。許多實驗室在進行基礎或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時，常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象。

(一)鼠腹腔巨噬細胞制備

1．用*吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。

2．四日后，注射羊紅細胞(1％懸液)lml于小鼠腹腔內(nèi)。

3．注射1h后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預溫的PBS，同時用手反復揉搓腹腔約1～2min，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞

4．用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。

5．用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

(二)炭粒廓清試驗

正常小鼠肝中庫普弗細胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10％炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時間反復取靜脈血。測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。

(三)吞噬功能的檢測

1．雞紅細胞(CRBC)懸液的制備取雞血l～2ml，阿氏液抗凝。試驗前用無菌生理鹽水沖洗3次，然后配成5％CRBC懸液。

2．吞噬試驗取皮皰滲出液O．5ml，加上述CRBC懸液0．01 ml混勻，置37℃水浴中30min，每隔10min輕輕搖動1次。1000r／mln離心5min，棄上清液。留少許液體將細胞充分混勻．涂片，甲醇固定，吉姆薩染色，油鏡下觀察并計數(shù)100～200個巨噬細胞。

3．結果觀察

(1)吞噬細胞百分率：即100個巨噬細胞中吞噬有CRBC的細胞數(shù)。

(2)吞噬指數(shù)：將100個巨噬細胞所吞噬的CRBC的總和除以100，所得每個巨噬細胞吞噬CRBC的平均數(shù)，即吞噬指數(shù)。

(四)巨噬細胞溶酶體酶的測定

    巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、*等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。

1．酸性磷酸酶的測定。

(1)*法：本法優(yōu)點是用普通試劑，價格便宜，一般實驗室均有條件做，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結構。缺點是細胞必需固定，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失，反應步驟也較多。

    該法基本原理是在適當?shù)拿感詶l件下，巨噬細胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使8*水解成磷酸鹽后，后者與*反應產(chǎn)生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內(nèi)酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細不同而分級判斷，顆粒數(shù)量少則細的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。

(2)偶氮法：本法操作簡便，反應液中的底物a一萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結構中的羥基(OH)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應，而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短。

2．非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定，酶活性喪失較慢，細胞經(jīng)涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗室采用。

(五)巨噬細胞促凝血活性測定

    激活巨噬細胞可產(chǎn)生一種與膜結合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預溫的正常兔血漿和CaCl2混合液，加入已經(jīng)黏附單層巨噬細胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關抗原或HbsAg等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。

(六)巨噬細胞表面受體的檢測

    成熟的巨噬細胞表面具有Fc受體和C3b受體，這些受體能識別經(jīng)IgG和C3b調(diào)理的顆粒，并迅速與之結合，促使細胞對相應顆粒的吞噬，為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行EA花環(huán)試驗，也可用抗原(E)抗體(A)補體(C)復合物作EAC花環(huán)試驗。