[方法]
1，取10/Il得自實(shí)驗(yàn)方案8．2中步驟6的混合物， 電轉(zhuǎn)入大腸桿菌的dut+ung+型菌株 （如XLl—B1ue） 中。大文庫(kù)容量的文庫(kù)可能需要多次電轉(zhuǎn)化。在我們對(duì)泛素系統(tǒng)的研究工作中，我們將文庫(kù)電轉(zhuǎn)入購(gòu)自Strat agene的XLl—Blue電感受態(tài)細(xì)胞?？梢蕴鎿Q的菌株包括SS320或TGl。

2．將電轉(zhuǎn)后細(xì)胞的適當(dāng)稀釋液鋪于2TY/Carb/Tet0瓊脂平板中， 以測(cè)定轉(zhuǎn)化株的數(shù)量。隨后可以使用平板上的菌落，通過(guò)PCR、限制性酶酶切及測(cè)序，來(lái)檢驗(yàn)文庫(kù)。

3．在250ml的錐形瓶?jī)?nèi)，將電轉(zhuǎn)后的菌液（得自步驟1）加入到40m1含有12ul 100mg/ml的羧芐*和20/A1 10mg/ml的四環(huán)素的2TY/Glu培養(yǎng)基中。

4．將菌液在37℃振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生*，直到OD600＝0．5，這通常需要4—5個(gè)小時(shí)。l小時(shí)后將12ul 100mg/ml的羧芐*20ul 10mg/ml的四環(huán)素①加入到錐形瓶中。

5．取出4m1菌液，加入1．5ml 50％的甘油，每管1m1分裝后于-80℃儲(chǔ)存。

6．將4ml VCSMl3輔助噬菌體（約1010pfu/ml）加入到剩余的菌液中，以使噬菌體與大腸桿菌之比達(dá)到10倍左右。將錐形瓶子37℃靜置15～30分鐘。

7．將l/4的菌液（約10ml），分別加入到4個(gè)含有100ml 2TY/Glu培養(yǎng)基、75ul 1100mg/ml的羧芐*和100ul 10mg/ml的四環(huán)素的250m1錐形瓶中。將錐形瓶于37℃振蕩培養(yǎng)，直到菌液開始輕微變渾（約2小時(shí)）。

8．加入70ul 100mg/ml的*，并于37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。

9．第二天上午，將每份過(guò)夜培養(yǎng)的菌液各自分裝入3只Oakridge離心管中，在Sorvall RC 5C plis型離心機(jī)中使用SS—34轉(zhuǎn)子， 于4℃12000 r/min離心15分鐘。

10．從每只離心管中取出30ml上清液，并與7．5ml PEG—NaCl溶液混合，以沉淀噬菌體顆粒。將這些離心管于冰上放置1小時(shí)，偶爾混勻液體。

11．如步驟9中所述，于12000r/min離心15分鐘，吸出并棄去上清液。

12．將噬菌體沉淀重懸于PBS中，每管1ml。將重懸后的噬菌體轉(zhuǎn)移至新的小離心管中，開用小型離心機(jī)于10000r/min離心，除去不溶性的殘?jiān)?。將干凈的上清液轉(zhuǎn)移至新的小離心管中并于4℃保存。

英文名稱 Mus musculus (Mouse) 衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 衰老關(guān)鍵蛋白1(FBLN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
細(xì)胞英文名稱 Homo sapiens (Human) 衰變加速因子(DAF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T
英文名稱 Homo sapiens (Human) 輸入蛋白9(IPO9)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 規(guī)格： 48T/96T