免疫酶組織化學技術

．酶標直接法和間接法

    Nakane(966)將辣根過氧化物酶(HRP) 標記在抗體免疫球蛋白分子上，創(chuàng)建了酶標記免疫組化的直接法、間接法和橋法。

2．PAP法

    Stemberger(969)在酶橋法的基礎上，建立了非標記抗體法，先將HRP免疫兔、羊或鼠，制成抗HRP抗體，再與HRP結合，制備成PAP復合物，其敏感性要比酶標直接法、間接法高出許多倍，其背景染色也要優(yōu)于直接法和間接法。在此基礎上又出現(xiàn)了許多PAP法變型方法，如雙PAP法、AAPAP法、APAAP法等。

3．ABC法

    20世紀60年代初，人們發(fā)現(xiàn)(biotin)與親和素(卵白素，avidin)之間具有高度的親和性，是自然界中具有zui強親和力的物質之一。到了20世紀70年代，人們又發(fā)現(xiàn)可以和抗體交聯(lián)，且或親和素與過氧化物酶或熒光素結合后，并不影響它們的生物學活性。Guesdon等(979)提出了標記、親和素以及—親和素搭橋法。在此基礎上，許世明(98)建立于標記親和素、間接橋法和ABC法。此方法已沿用了幾十年，得到普遍認可，物美價廉，背景干凈，但是缺點是操作比較麻煩，靈敏度沒有目前一些新的檢測系統(tǒng)高。法(或稱LSAB法)在ABC法基礎上作了許多改進，將鏈霉親和素直接偶合在一起，減少了操作步驟，增加了靈敏度?，F(xiàn)zui大的問題是內源性的干擾，造成非特異性背景染色，從而直接影響到對染色結果的判斷。尤其在人體肝、腎、腸等組織中存在豐富的內源性，加上目前常規(guī)應用的抗原修復方法可以激活內源性，非特異性背景染色在某些組織的免疫組化染色中已變得尤為突出。為了克服這一缺陷，人們想出了許多種克服的方法，例如在抗原修復后用親和素或用20％雞蛋清進行封閉，但是效果往往不夠理想。另一種克服方法是采用由Zymed公司推出的A(非檢測系統(tǒng))。該系統(tǒng)用FITC代替與二抗結合，三抗是結合了HRP的抗FIT抗體，而不用鏈霉親和素—HRP復合物。由于在人體組織中到目前為止尚未發(fā)現(xiàn)有內源性的能與FITC結合的物質，從而避免了因非特異性結合而產生的非特異性假陽性背景染色。

    雖然A系統(tǒng)成功地克服于非特異背景染色，而且具有與—親和素檢測系統(tǒng)相同的敏感性，但是卻沒有使檢測步驟有任何簡化。在實際工作中，為了適應臨床病理越來越多的日常工作需求，人們渴求一種更加簡便易行的方法，先后有多家公司推出二步法敏感的免疫組化檢測系統(tǒng)試劑，例如EnVision試劑、PicTureTM—plus和SuperPictureTM—plus試劑、UIP試劑和PowerVisionTM試劑。