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分離原理液—液分配色譜法

時(shí)間：2016/3/2閱讀：1205

分離原理液—液分配色譜法

（Liquid-liquid Partition Chromatography）及化學(xué)鍵合相色譜（Chemically Bonded Phase Chromatography）　流動(dòng)相和固定相都是液體。流動(dòng)相與固定相之間應(yīng)互不相溶（極性不同，避免固定液流失），有一個(gè)明顯的分界面。當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱，溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配。達(dá)到平衡時(shí)，服從于液相色譜計(jì)算公式：ELISA試劑盒

液相色譜計(jì)算公式式中,cs—溶質(zhì)在固定相中濃度；cm--溶質(zhì)在流動(dòng)相中的濃度； Vs—固定相的體積；Vm—流動(dòng)相的體積。LLPC與GPC有相似之處，即分離的順序取決于K,K大的組分保留值大；但也有不同之處,GPC中，流動(dòng)相對(duì)K影響不大,LLPC流動(dòng)相對(duì)K影響較大。

a. 正相液— 液分配色譜法（Normal Phase liquid Chromatography）: 流動(dòng)相的極性小于固定液的極性。

b. 反相液— 液分配色譜法（Reverse Phase liquid Chromatography）: 流動(dòng)相的極性大于固定液的極性。ELISA試劑盒

c. 液 — 液分配色譜法的缺點(diǎn)：盡管流動(dòng)相與固定相的極性要求*不同，但固定液在流動(dòng)相中仍有微量溶解；流動(dòng)相通過色譜柱時(shí)的機(jī)械沖擊力，會(huì)造成固定液流失。上世紀(jì)70年代末發(fā)展的化學(xué)鍵合固定相（見后），可克服上述缺點(diǎn)。現(xiàn)在應(yīng)用很廣泛（70~80%）。液—固色譜法流動(dòng)相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來進(jìn)行分離的。

其作用機(jī)制是：當(dāng)試樣進(jìn)入色譜柱時(shí)，溶質(zhì)分子（X）和溶劑分子（S）對(duì)吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附（未進(jìn)樣時(shí)，所有的吸附劑活性中心吸附的是S）。ELISA試劑盒

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分離原理液—液分配色譜法

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