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小鼠Smad7 elisa檢測試劑盒操作步驟

時(shí)間:2021/9/27閱讀:651
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小鼠Smad7 elisa檢測試劑盒操作步驟:

. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔0孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品00μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.

0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后5分鐘。

人胃癌細(xì)胞;MKN-45

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;MuM-2B

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;MuM-2C

人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H292

人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞;OCM-A

人胃腺癌細(xì)胞;SGC-790 [SGC790]

人低分化肺腺癌細(xì)胞;SK-LU-

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;ZR-75-30

人急性T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞;I 2.(CRL-2572)

人膀胱癌細(xì)胞;5637(HTB-9)

人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞;786-O [786-0]

人腎透明細(xì)胞癌;Caki-

人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-

人食管癌細(xì)胞;EC09

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-5 [HCT5]

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 74T [LS74T]

人乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-468

人肺支氣管癌細(xì)胞;NCI-H650

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H975

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H2087

人小細(xì)胞肺癌;NCI-H2227

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H23

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小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2

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