ELISA試劑是怎樣分離純化酶
常用的鹽析劑是硫酸銨，其溶解度大、價(jià)格便宜。硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)的能力很強(qiáng)，其飽和溶液能使大多數(shù)的蛋白質(zhì)沉淀下來(lái)。對(duì)酶沒(méi)有破壞作用。
pH的控制：應(yīng)從酶的溶解度與穩(wěn)定性兩個(gè)方面考慮，ELISA試劑在酶等電點(diǎn)時(shí)其溶解度zui小易沉淀，但有些酶再等電點(diǎn)時(shí)穩(wěn)定性較差，因此要選擇H值.一般要求在酶zui穩(wěn)定的pH值的前提下再考慮zui適宜酶沉淀的pH值。在操作中一旦確定H值后，在添加硫酸銨之前甲酸或堿調(diào)節(jié)好酶液的pH值，要盡量避免溶液pH值的波動(dòng)以免破壞酶的穩(wěn)定性。在添加硫酸銨時(shí)要注意攪拌，并注意硫酸銨的加入速度，一般是由少到多，緩慢加入，硫酸銨盡可能磨成細(xì)粉。
溫度的控制：有些酶在較高溫度下穩(wěn)定性能較好，ELISA試劑可在常溫下進(jìn)行鹽析操作，而對(duì)于大多數(shù)酶，盡可能在低溫下操作。
酶液的凈置：加完硫酸銨后，酶液要靜置一段時(shí)間，使酶蛋白*沉淀下來(lái)，酶靜置后，就不要再加以攪拌。
2．有機(jī)溶劑沉淀
ELISA試劑有機(jī)溶劑選擇：可用于酶蛋白沉淀的有機(jī)溶劑包括醇類物質(zhì)等，如甲醇、乙醇、異丙醇。乙醇的親水性能較好，可防止蛋白質(zhì)的變性，酶蛋白在其中的溶解度也較低。
有機(jī)溶劑沉淀操作：有機(jī)溶劑一般都使蛋白質(zhì)變性，當(dāng)溫度較高時(shí)變性蛋白質(zhì)分子就會(huì)變成*失活。因此用有機(jī)溶劑處理時(shí)在0℃以下進(jìn)行。用有機(jī)溶劑沉淀得到的酶蛋白不要放置過(guò)久，要盡快加水溶解。
3.聚合物絮凝劑沉淀 聚合物絮凝劑，ELISA試劑如葡聚糖和聚乙二醇，與酶分子爭(zhēng)奪水分子，具有脫水作用使酶沉淀。聚乙二醇作為一種沉淀劑的優(yōu)點(diǎn)是在水溶液中，其濃度可達(dá)到50%，濃度為6%-2%的蛋白質(zhì)大都可以沉淀下來(lái)。這種試劑不需要低溫操作，而且對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定還有一定的保護(hù)作用。聚乙二醇不會(huì)被吸附，故在離子交換吸附前不必去除。