蛋白質(zhì)系列

CAT#:RS90707-50

常溫運(yùn)輸，4℃保存

RICKY

動(dòng)植物總蛋白微量提取試劑盒

使用手冊(cè) 

上海瑞齊生物科技有限公司                            shrqsw

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品用于快速提取動(dòng)植物總蛋白，用于SDS-PAGE凝膠電泳和Western印跡分析以及蛋白活性測(cè)定等。本產(chǎn)品的其主要特點(diǎn)是：

提取過程十分簡(jiǎn)便，勻漿離心即可，整個(gè)過程只需要十幾分鐘。

采用*的溫和裂解成分，蛋白保持天然活性。

適用于各種動(dòng)植物組織材料，包括新鮮或冰凍的材料。

得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D電泳、Western印跡分析以及蛋白活性測(cè)定等下游實(shí)驗(yàn)。

一次可以處理100mg左右的樣品，足夠進(jìn)行幾十次SDS-PAGE mini膠電泳檢測(cè)。

規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸，4℃保存，5X SDS-PAGE上樣液短期4℃保存，*可放-20℃保存，有效期一年。

使用方法

使用前，請(qǐng)?jiān)谌芤篈中加入自備的1M DTT溶液50uL。

一：勻漿法

注意：對(duì)致密的實(shí)體組織（如肌肉），用Polytron式勻漿機(jī)勻漿處理。

• 稱取動(dòng)物或植物組織樣品100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉(zhuǎn)移到10-15 mL的塑料離心管中。
• 加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式勻漿機(jī)勻漿，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。為了避免產(chǎn)熱，可以分多次勻漿，其間放冰上讓勻漿液冷卻。
• 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000 g離心10分鐘，組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?/span>
• 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

二：直接研磨法

注意：可以使用玻璃和陶瓷的研缽，也可以使用與微量離心管式的研磨杵 

• 稱取動(dòng)物或植物組織樣品100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的研缽或離心管中。
• 加入1ml溶液A，用研磨杵研磨，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。
• 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000g離心10分鐘，組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?/span>
• 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

三：液氮研磨法

注意：使用玻璃和陶瓷的研缽

• 取大約100 mg動(dòng)物或植物組織樣品，轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的研缽中。
• 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。
• 加入1ml溶液A溶解，然后將溶液全部轉(zhuǎn)移到1.5 mL的塑料離心管中。
• 4℃ 12,000 g離心10分鐘，組織殘?jiān)槠瑢⑿纬沙恋怼?/span>
• 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的1.5 mL塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進(jìn)行SDS-PAGE電泳，可取部分到離心管中，加入5× SDS-PAGE上樣緩沖液（終濃度為1×），在沸水中處理5分鐘后立即上樣電泳。

注意：

1．如果4℃ 12,000 g離心10分鐘后得到的上清液中還有可見的沉淀，可以將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中后再4℃ 12,000 g離心10分鐘，以去除可見的小碎片。

2．植物組織中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代謝產(chǎn)物，如果需要除去植物蛋白樣品中殘存的色素等雜質(zhì)，可以在zui后得到的上清液中加入5倍體積的冷丙酮或冷甲醇，混勻后-20℃放置1小時(shí)或過夜，然后4℃ 12,000 rpm離心10 min，棄上清后室溫風(fēng)干，然后將樣品溶于自備的后續(xù)實(shí)驗(yàn)緩沖液中即可。經(jīng)過此純化處理后，部分蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變性，不能再用于活性檢測(cè)。