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技術文章
硝酸纖維素濾膜前后進行的ＲＮＡ染色
點擊次數(shù)：422 發(fā)布時間：2011-3-24
硝酸纖維素濾膜前后進行的ＲＮＡ染色方法Ｉ：
１）電泳結束后，含乙二醛－ＤＭＳＯ的凝膠應浸入含溴化乙錠（0.5 μg/ml）的10mmol/L磷酸鈉（pH7.0）溶液。甲醛凝膠需用無ＲＮＡ酶的水淋洗，用20xＳＳＣ溶液浸泡，隨后用含溴化乙錠（0.5μg/ml）的20xＳＳＣ溶液染色。
２）于室溫染色５－１０分鐘，在紫外燈下觀察，照像。
３）按前所述方法， 將凝膠中的ＲＮＡ轉移至硝酸纖維素濾膜，轉移后能常在學光下也可看出已染色的ＲＮＡ條帶。
這種方法僅適用于每一泳道均含有相當大量（如５μg 以上）的ＲＮＡ的情況。
硝酸纖維素濾膜前后進行的ＲＮＡ染色方法Ⅱ：
硝酸纖維素濾膜上的ＲＮＡ也可以用下述方法染色：從干烤后的硝酸纖維素濾膜上剪下所需的條帶進行染色，也可以用經(jīng)過雜交并經(jīng)Ｘ光片曝光后的整張濾膜進行染色（Ａ.Ｅfstratiadis,未了表材料）。
１）將干燥的濾膜浸入５％冰乙酸中，于室溫浸泡15分鐘。
２）再將濾膜轉移至0.5mol/L乙酸鈉（pH5.2）、0.04％*溶液中， 于室溫浸泡５－１０分鐘。
３）用水淋洗濾膜５－１０分鐘后，可見ＲＮＡ分子量標準參照物帶型銳利而poly（A）+mRNA為一模糊帶型，由許多長度范圍從500堿基以下至５kb以上的各種mＲＮＡ共同組成，mＲＮＡ的平均長度約為２kb。