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細(xì)胞內(nèi)即時影像檢測共振傳感器誕生
點擊次數(shù)：356 發(fā)布時間：2011-6-27
開發(fā)了一個共振傳感器，來檢測細(xì)胞內(nèi)的氧化還原動力學(xué)的即時影像。他在熒光半衰期影像顯微鏡研究領(lǐng)域獲得了許多重要的研究成果。其研究組在之前的研究中已建立了一系列的FTRET供體和受體熒光蛋白在氧化還原敏感開關(guān)。
將氧化還原敏感的綠色熒光蛋白（GFPs）的概念，轉(zhuǎn)化為FRET的成像平臺。以FRET為基礎(chǔ)的感應(yīng)器的原理主要是應(yīng)用氧化還原反應(yīng)引起氧化還原敏感開關(guān)的構(gòu)象變化，改變連接在這個開關(guān)的兩個熒光蛋白（供體和受體）間的距離，從而產(chǎn)生可被檢測的共振效率之改變。在氧化狀態(tài)下，感應(yīng)器的熒光散射波長光譜紅移（由于受體熒光增加），這和局部感應(yīng)器濃度變化或是激發(fā)光的強(qiáng)度無關(guān)。以FRET為基礎(chǔ)的感應(yīng)器克服了一般以熒光強(qiáng)度為基礎(chǔ)的影像方法所衍生的障礙，因為只有能量轉(zhuǎn)移的效率改變時，F(xiàn)RET受體分子的熒光才會增加。FRET的這種特異性和可區(qū)別性的特征，是推動發(fā)展以共振為基礎(chǔ)，而不是只依賴單一組成的熒光強(qiáng)度變化作為分析方法的主要動機(jī)之一。
主要的突破在于改進(jìn)光訊號的動態(tài)范圍，也就是說加強(qiáng)了氧化態(tài)和還原態(tài)之間的訊號差。增加光訊號的動態(tài)范圍使得探針更容易區(qū)別復(fù)雜的生物樣品中的氧化還原狀態(tài)。此外，新探針中較高的氧化中點電位是一個用來偵測哺乳類細(xì)胞中*氧化還原電位的理想工具。
以FRET為基礎(chǔ)的策略有以下的優(yōu)點：（1）能夠量化氧化還原狀態(tài)的變化，（2）不依賴感應(yīng)器的濃度，（3）模塊化設(shè)計，可以通過改變開關(guān)或模塊的熒光探針而地調(diào)整氧化還原敏感性和量測范圍。研究人員認(rèn)為新開發(fā)的氧化還原敏感性探針可能是至關(guān)重要的一個工具來協(xié)助我們了解*藥物和氧化劑的藥理和毒理反應(yīng)。一個以氧化還原敏感的螢光蛋白（roGFP）為基礎(chǔ)的新穎位差量測探針。利用roGFP感應(yīng)器來量測需要有兩組被不同波長激發(fā)出來的螢光影像強(qiáng)度。利用兩組巰基在雙硫鍵形成/裂解的的氧化還原態(tài)之下，roGFP所產(chǎn)生的zui大激發(fā)光波長來求其比值。