無血清傳代培養(yǎng)

黏附因子:如果除掉血清,就必須直接在培養(yǎng)基中加入25-50ug/ml的粘連蛋白或1-5ug/ml的層粘連蛋白用以處理塑料培養(yǎng)器皿的生長表面.用1mg/ml的多聚L-融賴氨酸預(yù)處理塑料培養(yǎng)器皿,可增強人類二倍體成纖維細胞的存活率.

蛋白酶抑制劑:利用*進行傳代培養(yǎng)后,加入血清可抑制剩余的蛋白水解酶的活性,所以用無血清培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)時必須在無血清培養(yǎng)基中加入如大豆*抑制劑或0.1mg/ml的牛*抑制劑等蛋白酶抑制劑.由于粗制*是由多種蛋白酶組成的復(fù)雜的混合物,其中不同的成分需要不同的抑制劑,因而用純的*及其對應(yīng)的*抑制劑.否則就要用離心的方法洗滌細胞以去除*.在無血清條件下鏈蛋白酶有可能通過被稀釋而失活,不存在一系列的中和作用.

*和其他蛋白酶:用*處理無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞時,需要特別注意,因為細胞易碎,可能需要使用純化的結(jié)晶*以及降低*的溫度以減少細胞的損傷.選擇蛋白酶的種類可以避免動物蛋白來源的物質(zhì)存留于細胞.用重組的*可代替提純的prorcine.非哺乳動物蛋白酶也可選用蛋白酶.解離酶,膠原酶是細菌的蛋白酶,不能用*抑制劑使其失活,可能需要用離心的方法去除.在沒有使酶失活的無血清條件下,可以用稀釋的方法使Pronase失活.蛋白酶是非常有效的,但對一些細胞有毒性.如果有上皮細胞存在,用Dispase和膠原酶消化時,不能得到單細胞懸液.