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大鼠elisa檢測試劑盒不同類型的樣本的處理方法

時間:2017/9/30閱讀:848
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通常我們可用于大鼠elisa檢測試劑盒檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步。
1、  血清
    血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
    用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
    采血過程中應(yīng)避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測的不準確性。同時也應(yīng)避免細菌污染,因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
2、  血漿
    ELISA試劑盒用含抗凝劑的*或離心管采集血液標本,標本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。    常用的抗凝劑為EDTA、*和*等,檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
3、  細胞培養(yǎng)上清
    取細胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
4、  細胞裂解液
1)  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用*消化細胞,加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2)  收集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
3)  加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)  將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
5)  4℃ 10000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
5、組織勻漿液
1)  將組織樣本用PBS (0.01 [錨點] [錨點] M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2)  將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
3)  將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
4)  吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min,取上清即可檢測。
    大鼠elisa檢測試劑盒總的來說,因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。
含量測定    *    對照品    100194-200502        100mg
含量測定    *    對照品    100195-199701        50mg
GC法含量測定用    鄰位甲酚    對照品    100196-200302        1000mg
檢查    *    對照品    0197-9601        50mg
UV法含量測定    *    對照品    100198-200403        50mg
含量測定    *    對照品    100199-199401        50mg
檢查    *    對照品    100200-200202        50mg
含量測定    氫溴酸右*    對照品    100201-200502        100mg
含量測定    *    對照品    100203-200503        100mg
大鼠elisa檢測試劑盒

 

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