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更新時間：2017-11-13 14:00:23瀏覽次數(shù)：274次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線“Anti-GRAF1抗體,Rho GTP酶激活蛋白26抗體"抗體規(guī)格0.1ml、0.2ml、1ml，抗體產(chǎn)品有效期一年，質(zhì)保三個月，質(zhì)保期內(nèi)出現(xiàn)任何質(zhì)量問題或是出不了實(shí)驗結(jié)果均可免費(fèi)退換：
上海研盟生物科技有限公司Anti-GRAF1抗體,Rho GTP酶激活蛋白26抗體*，主要應(yīng)用于WB、IHC、IF、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗中。說明書隨貨發(fā)送，您也可以直接我司在線客服索取。客服
【中文名稱】：Rho GTP酶激活蛋白26抗體
【英文名稱】：Anti-GRAF1
【產(chǎn)品編號】：BYK-11248R
【規(guī) 格】：0.1ml/0.2ml
【相關(guān)標(biāo)記】：Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 647、AP、APC、Biotin、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、FITC、Gold、HRP、PE、PE-Cy3、PE-CY5、PE-CY5.5、PE-CY7、RBITC.
【濃 度】：1mg/1ml
【抗體來源】：Rabbit or Mouse or Goat
【克隆類型】：polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】：一抗
【產(chǎn)品應(yīng)用】：可以用于做石蠟切片免疫組化，冰凍切片免疫組化，Elisa，WB，免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗。
Anti-GRAF1抗體,Rho GTP酶激活蛋白26抗體產(chǎn)品介紹：Cellular signaling by G-proteins is down-regulated by GTPase-activating proteins (GAPs), which increase the rate of GTP hydroylsis. The GTPase regulator associated with focal adhesion kinase (GRAF) has GAP activity toward Rho A and Cdc42, but not Rac1. GRAF is ubiquitously expressed with high levels in heart and brain. Expression of GRAF causes clearing of stress fibers and formation of long actin based filopodial-like extensions. Fusion of MLL with GRAF, MLL/GRAF, is included in a rare genetic subgroup of acute myeloid leukemia (AML) cases.
英文別名：arhgap 26; ARHGAP26; FLJ42530; GRAF; GRAF1; GTPase regulator associated with focal adhesion kinase; GTPase regulator associated with focal adhesion kinase pp125(FAK); KIAA0621; oligophrenin 1 like protein; Oligophrenin-1-like protein; oligophrenin1like protein; OPHN1L; OPHN1L1; RHG26_HUMAN; Rho GTPase activating protein 26; Rho GTPase activating protein26; Rho GTPase-activating protein 26; Rho-type GTPase-activating protein 26.
Western可以參考如下步驟進(jìn)行操作：
1、收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當(dāng)?shù)牧呀庖毫呀赓N壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞或組織樣品。對于某些特定的亞細(xì)胞組份蛋白，例如細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關(guān)文獻(xiàn)提取這些亞細(xì)胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進(jìn)行抽提。
收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量*，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當(dāng)?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2、電泳(Electrophoresis)
（1）、SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻(xiàn)資料進(jìn)行配制，也可以使用博研生物生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。該試劑盒提供了除水和配膠器具外的所有試劑以及配制各種濃度SDS-PAGE的配方。
（2）、樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內(nèi)可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關(guān)文獻(xiàn)資料配制，也可以使用我公司生產(chǎn)的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X) 。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。
（3）、上樣與電泳
冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果，以及判斷蛋白分子量大小，使用預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)。
電泳時通常*在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍(lán)進(jìn)入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設(shè)置在80-100V，高電壓可以設(shè)置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求。為了電泳方便起見，也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式，通常把電壓設(shè)置在100V，然后設(shè)定定時時間為90－120分鐘。設(shè)置定時可以避免經(jīng)常發(fā)生的電泳過頭。
通常電泳時溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況，預(yù)計目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。
3、轉(zhuǎn)膜(Transfer)
我們*在Western實(shí)驗中選用PVDF膜。硝酸纖維素膜(NC膜)或PVDF膜（二氟化樹脂膜膜孔徑：0.45um)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產(chǎn)商的*使用步驟。
通常如果使用Bio-Rad的標(biāo)準(zhǔn)濕式轉(zhuǎn)膜裝置，可以設(shè)定轉(zhuǎn)膜電壓120V，轉(zhuǎn)膜時間為30-60分鐘。具體的轉(zhuǎn)膜時間要根據(jù)目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉(zhuǎn)膜時間越長，目的蛋白的分子量越小，需要的轉(zhuǎn)膜時間越短。
在轉(zhuǎn)膜過程中，特別是高電流快速轉(zhuǎn)膜時，通常會有非常嚴(yán)重的發(fā)熱現(xiàn)象，把轉(zhuǎn)膜槽放置在冰浴中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜的效果可以觀察所使用的預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，通常分子量zui大的1-2條帶較難全部轉(zhuǎn)到膜上。轉(zhuǎn)膜的效果也可以用麗春紅染色液對膜進(jìn)行染色，以觀察實(shí)際的轉(zhuǎn)膜效果。也可以用考馬斯亮藍(lán)快速染色液對完成轉(zhuǎn)膜的SDS-PAGE膠進(jìn)行染色，以觀察蛋白的殘留情況。
4、封閉(Blocking)
轉(zhuǎn)膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預(yù)先準(zhǔn)備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉(zhuǎn)膜液。從轉(zhuǎn)膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產(chǎn)生較高的背景。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動,室溫封閉60分鐘。對于一些背景較高的抗體，可以在4℃ 封閉過夜。
5、一抗孵育(Primary antibody incubation)
參考一抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。
用微型臺式真空泵吸盡封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以在4℃緩慢搖動孵育過夜?；厥找豢埂＜尤隬estern洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
6、二抗孵育(Secondary antibody inucubation)
參考二抗的說明書，按照適當(dāng)比例用Western二抗稀釋液稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗。
用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側(cè)擺搖床上緩慢搖動孵育一小時?；厥斩?，加入Western洗滌液，在側(cè)擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液，洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結(jié)果背景較高可以適當(dāng)延長洗滌時間并增加洗滌次數(shù)。
7、蛋白檢測(Detection of proteins)
參考相關(guān)說明書，使用BeyoECL, Western 熒光檢測試劑等ECL類試劑來檢測蛋白。
洗片時可以使用X光片自動洗片機(jī)。如果沒有自動洗片機(jī)，可以用顯影定影試劑盒自行配制顯影液和定影液進(jìn)行手工洗片。
8、膜的重復(fù)利用(Membrane recovery)
如果蛋白樣品非常寶貴，可以使用Western一抗二抗去除液處理蛋白膜，以重復(fù)利用蛋白膜。
相關(guān)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品：
PS-1 （Presenilin-1/S182）（NT） 早老素蛋白-1抗體
PS-1（Presenilin-1/S182）（CT） 早老素蛋白-1抗體
PS-1（Presenilin-1/S182）（NT） 早老素蛋白-1抗體
PSA (Prostate specific antigen) for conjugation and detection 鼠抗前列腺特異性抗原抗體
PSA (Prostate Specific Antigen) mouse monoclonal(use for coating) 鼠抗前列腺特異性抗原單克隆抗體(包被)
PSA (Prostate Specific Antigen) mouse monoclonal(use for detection) 鼠抗前列腺特異性抗原單克隆抗體(優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品)
CPSA(complex edprostate specific antigen mouse monoclonal) 鼠抗復(fù)合前列腺特異性抗原單克隆抗體
PSAP/PAP(Prostate Specific Acidic Phosphatase) 前列腺酸性磷酸酶抗體
PSCA (Prostate Stem Cell gen) 抗前列腺干細(xì)胞抗原抗體
PSD-95 突觸后密度蛋白95抗體
PSGL-1/CD162(P-selectin glycoprotein ligand 1) P選擇素糖蛋白配體1抗體
PSMD9/Bridge-1(proteasome modulator 9) 蛋白酶調(diào)解因子9
P-selectin/CD62p P選擇素抗體
L-Selectin/CD62L (ELAM-1) L選擇素抗體
E-Selectin/CD62E E選擇素抗體
Patched/PTCH (Patched protein homolog 1) Hh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑膜蛋白受體抗體
CD63/MLA1 抗黑色素瘤相關(guān)抗原（溶酶體膜糖蛋白）抗體
CD66a/CEACAM1 癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子1抗體
PTEN/MMAC1（NT） 一種腫瘤抑制基因（N端）
PTEN/MMAC1（CT）human, mo, rat, pig, dog, bovine, hoBYKe, chicken 一種腫瘤抑制基因抗體（C端）
PGE2(Prostaglandin E synthase 2) 前列腺素E2抗體
PTGEs（Prostaglandin E synthase） 前列腺素E合成酶抗體
PTHrP/PTHLH 甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白抗體
PTN(pleiotrophin) 多效生長因子抗體
PTPRJ/CD148/DEP1 CD148抗體
PTP-1B(Protein tyrosine phosphatase non receptor type 1) 蛋白*磷酸酶-1B
Parvalbumin 微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗體
PTTG（Pituitary Tumor Transforming Gene） 垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因抗體
Rad51 Rad51抗體
Rad52(RAD52 homolog ) Rad52抗體
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