菲亞生物脂肪源干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

（1）吸脂術(shù)時(shí)用無(wú)菌針管從臀上方吸取深層脂肪組織20 mL。

（2） 在1 h內(nèi)將其移至離心管內(nèi)，加入等量PBS緩沖液，充分振蕩后低速離心800 r/min×10 min。

（3）反復(fù)沖洗3次后加入等量15 g/L I型膠原酶，37℃水浴中充分振蕩30 min，再加入等量胎牛血清（FBS）中止。

（4）低速離心10 min后棄去上清. 將下層細(xì)胞用PBS懸浮后加入16 mmol/L NH4Cl 37℃水浴中10 min以裂解紅細(xì)胞. 低速離心10 min后再用PBS沖洗3次. zui后將細(xì)胞用含100 mL/L FBS+10 g/L青霉素的DMEM懸浮后移入培養(yǎng)瓶中，37℃，50 mL/L CO2培養(yǎng)箱中孵育。

（5）48 h后換液，棄去懸浮細(xì)胞. 隨后每3天換液，1周后傳代. 將第3代細(xì)胞用于流式細(xì)胞儀檢測(cè). 濃集細(xì)胞到109/L后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

（6）細(xì)胞傳至第3代時(shí)將其以2×107/L的細(xì)胞數(shù)分別轉(zhuǎn)入各定向培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng). 誘導(dǎo)培養(yǎng)2周后，對(duì)成脂誘導(dǎo)組進(jìn)行油紅Ｏ脂肪顆粒染色。

    菲亞生物提醒實(shí)驗(yàn)者們只需按照步驟來(lái)提取脂肪干細(xì)胞，形態(tài)類似干細(xì)胞，并且具有多向分化的能力，這就足以說(shuō)明提取的細(xì)胞是干細(xì)胞。