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技術(shù)文章

超聲波細(xì)胞破碎儀的維護(hù)保養(yǎng)及解決方案

閱讀:10          發(fā)布時(shí)間:2025-1-13

  超聲波細(xì)胞破碎儀又名超聲微波協(xié)同萃取儀,超聲波細(xì)胞裂解儀,超聲波納米材料粉碎機(jī)。超聲波細(xì)胞破碎儀由超聲波發(fā)生器和換能器兩大部分組成(有的配置有隔音箱)。具有破碎組織、細(xì)菌、病毒、孢子及其它細(xì)胞結(jié)構(gòu),勻質(zhì)、乳化、混合、脫氣、崩解和分散、浸出和提取,加速反應(yīng)等功能,故廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)、化學(xué)、制藥、食品、化妝品、環(huán)保等實(shí)驗(yàn)室研究及企業(yè)生產(chǎn)。

  日常維護(hù)

  1、溫度保護(hù)設(shè)置點(diǎn)必須比室溫或樣品溫度高5℃以上。當(dāng)發(fā)生溫度保護(hù)時(shí)可按SET健4秒以上,重新設(shè)置保護(hù)值。設(shè)錯(cuò)溫度時(shí)也可按SET鍵4秒以上復(fù)位。

  2、嚴(yán)禁在變幅桿未插入液體內(nèi)(空載)時(shí)開機(jī),否則會損壞換能器或超聲波發(fā)生器。

  3、對各種細(xì)胞破碎量的多少,時(shí)間長短,功率大小,有待用戶根據(jù)各種不同細(xì)胞再摸索確定。此儀器輸出功率較大,如選用Ф2、Ф3或Ф6變幅桿時(shí),應(yīng)把功率開得小些,以免變幅桿過載而斷裂。

  4、用一定時(shí)間后變幅桿末端會被空化腐蝕而毛,可用油石或銼刀銼平,否則會影響工作效果。

  5、變幅桿選擇開關(guān)是用來匹配不同規(guī)格的變幅桿與發(fā)生器的頻率,阻抗的一致性。如換能器組件的頻率與發(fā)生器的阻抗不一致時(shí),超聲波就不能工作。

  6、不需預(yù)熱,使用應(yīng)有良好的接地。

  7、在超聲破碎時(shí),由于超聲波在液體中起空化效應(yīng),使液體溫度會很快升高,用戶對各種細(xì)胞的溫度要多加注意。建議采用短時(shí)間(每次不超過5秒)的多次破碎,同時(shí)可外加冰浴冷卻。

  8、超聲波細(xì)胞破碎儀采用無工頻變壓器的開關(guān)電源,在打開發(fā)生器機(jī)殼后切勿亂摸,以防觸電。本儀器性能可靠,一般不易損壞?! ?、超聲波細(xì)胞破碎儀應(yīng)安放在干燥,無潮濕、無陽光直射、無腐蝕性氣體的地方工作。

  10、短時(shí)間的多次工作,工作時(shí)間1-2秒,間隙時(shí)間1-2秒,比連續(xù)長時(shí)間工作的效果要好。為防止液體發(fā)熱,可設(shè)定較長的間隙時(shí)間。

  日常保養(yǎng):用完后用酒精擦洗探頭或用清水進(jìn)行超聲!

  維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程

  1如果探頭必須與固體樣品接觸,請使用切成70毫米長的20毫米直徑不銹鋼管。不要用玻璃管

  2微端頭只能與液接觸,不得與其它物體接觸

  3在每次使用前,把探頭端頭放在水或者酒精中并且通電源數(shù)秒以去除殘余物

  4探頭可以用高壓蒸鍋消毒,也可以浸入開水中消毒,也可以用消毒滅菌劑消毒

超聲波細(xì)胞破碎儀的維護(hù)保養(yǎng)及解決方案(圖1)

  5不得把錐形微端頭用在連接器上。沒有連接器不要用直端頭。在處理低表面張力液體時(shí)不得使用帶螺紋端和可更換的端頭的探頭

關(guān)于超聲波細(xì)胞破碎儀的相關(guān)注意問題介紹

細(xì)菌工程菌胞內(nèi)表達(dá)主要分為兩種形式,一種是在強(qiáng)啟動子條件下的高效表達(dá),由于蛋白的過度表達(dá);

使蛋白不能及時(shí)有效折疊而發(fā)生無規(guī)則卷曲,以固體顆粒的形式堆積于胞間質(zhì)中,這就是所說的包涵體;

另外一種是間質(zhì)內(nèi)的可溶性表達(dá),即可以發(fā)生正常折疊,具有生物活性。

一般情況下,細(xì)菌只要被正常破壁就可以通過離心的形式將包涵體和可溶性表達(dá)的蛋白分離開。

超聲破碎的條件一般是300w,10s/10s,20分鐘,具體條件可根據(jù)自身情況而定。

超聲前菌體的準(zhǔn)備:菌液離心后,先用PBS將菌沉淀洗2-3遍;

然后按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體,裂解液的成分:

50mMTris-HCl,pH8.0,2mMEDTA,100mMNaCl,加至100ug/ml,0.1%TritonX-100。切記冰浴超聲!

如何判斷是否超聲,根據(jù)經(jīng)驗(yàn),一般有以下幾個(gè)方面:

1,外觀判斷:超聲前菌懸液是渾濁的,超聲后變的透明、清澈。

2,液體的粘性:超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

3,高速離心:有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000g10min,比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn))。沉淀是未破碎或破碎不的菌體。

4,染色:破碎后的菌液涂片,革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘,鏡檢。

(超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染)

一些需要注意的問題:

1,蛋白以包涵體形式表達(dá),追求的是高破碎率,要求細(xì)胞碎片很小;

而另一種蛋白是可溶形式表達(dá),所以細(xì)胞碎片不能很小,兩種情況要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分離。

2,如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀,說明超聲功率太強(qiáng)。

3,超聲時(shí)間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響。

4,盡量防止泡沫的產(chǎn)生。


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