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酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)

閱讀:426發(fā)布時(shí)間:2017-5-3

酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

   酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù),ELISA過程包括抗原(抗體)吸附在固相載體上稱為包被,加待測(cè)抗體(抗原),再加相應(yīng)酶標(biāo)記抗體(抗原),生成抗原(抗體)——待測(cè)抗體(抗原)——酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物,再與該酶的底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。借助分光光度計(jì)的光吸收計(jì)算抗體(抗原)的量,待測(cè)抗體(抗原)的定量與有色產(chǎn)生成正比。

   實(shí)驗(yàn)原理

   (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫徐活性;

   (2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

   (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比。因此,可以按底物顯色的程度顯示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

   應(yīng)用:

   ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本。因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來檢測(cè)抗體,而且可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括為四個(gè)方面:1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成分的定位。2、研究酶抗體的合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成分。


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