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江蘇菲亞生物科技有限公司
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免疫金銀染色（IGSS）操作流程
2017-9-20 閱讀(2232)
一、基本原理
免膠體金檢測技術(shù)是用金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物應(yīng)用免疫組化原理檢測組織內(nèi)抗原抗體的技術(shù)，常用膠體金（鐵、汞等）重金屬離子。由于膠體金容易制成各種大小的顆粒且有很高的電子密度及分辨率，又不影響抗體的活性，因此既可用于免疫組化又適于免疫電鏡技術(shù)。
- 操作步驟
1、石蠟切片IGSS
（1）切片脫蠟至水。
（2）0．1％胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修復(fù)20min（98℃），自然冷卻至室溫。
（3）0．05mol/L（pH7．4）TBS洗3×3min。
（4）l％EA（卵蛋白）15min，不洗。
（5）適當(dāng)稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h，或37℃孵育1h。
（6）0．05m01/L（pH7．4）TBS洗3×5min。
（7）0．02m01/L（pH7．4）TBS（內(nèi)含0．1％BSA）洗10min。
（8）1％EA 15min，不洗，1：10～1：20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h，或37℃孵育30min。
（9）0．05mol/L（pH7．4）TBS洗10min。
（10）1％戊二醛洗10min。
（11）雙蒸水洗5min。
（12）1％明膠洗5min。
（13）銀避光顯影8～15min。
（14）雙蒸水洗15min。
（15）固定：用顯影定影液（1：4或1：10）固定5min，也可以用15％硫酸鈉-20％硫代硫酸鈉混合液固定1～3min，或用1％戊二醛固定5min，50℃溫水洗3～6min。
（16）襯染，核固紅襯染3min或甲基綠襯染3min。
（17）常規(guī)脫水，二甲苯透明，常規(guī)樹膠封片。
（18）鏡檢：陽性物質(zhì)呈黑色或黑褐色，顆粒分布于抗原—抗體反應(yīng)部位；背景較干凈，呈紅色。
2、冰凍切片IGSS
做冰凍切片的組織可先經(jīng)過固定再作切片，也可先制作冰凍切片，然后再固定。這要根據(jù)保存抗原的需要而定，固定過的組織可用含20％蔗糖的PBS（0．1mol/L，pH7．4）浸泡過夜，使切片減少冰結(jié)晶，保持組織細(xì)胞良好的形態(tài)結(jié)構(gòu)。切片人0．05mol/L（pH7．4）TBS洗3×3min，染色步驟同石蠟切片。
