 |
江蘇菲亞生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 轉(zhuǎn)化生長因子 elisa試劑盒,植物葉酸 elisa試劑盒,豬藍(lán)耳(PRRS)elisa kit |
員.png)
公司信息
細(xì)胞活性定磷比色法定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
2019-1-24 閱讀(1335)
實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進(jìn)冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。
一、 樣品準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好 25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或 60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測培養(yǎng)細(xì)胞（5 X 106細(xì)胞）
2． 小心加入 xx 毫升預(yù)冷的 SBJ 清理液（試劑 A），覆蓋生長表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞
5． 加入 xx 毫升 SBJ 清理液（試劑 A），混勻細(xì)胞
6． 移入到預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管（注意：懸浮細(xì)胞從這一步驟開始）
7． 放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 5 分鐘，速度為 300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入 xx 微升S B J 裂解液（試劑 B），充分混勻
10．轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 1.5 毫升離心管
11．強(qiáng)力渦旋震蕩 15 秒
12．置于冰槽里孵育 30 分鐘
13．放進(jìn) 4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心 5 分鐘，速度為 16000g（或 13000RPM）
14．小心移取 500 微升上清液到新的預(yù)冷的 1.5 毫升離心管
15．移取 2 微升進(jìn)行蛋白定量測定
16．即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作
二、細(xì)胞活性定磷比色法定量檢測試劑盒測定準(zhǔn)備
1． 準(zhǔn)備好待測樣品（例如細(xì)胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：樣品須澄清）
2． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為 30℃）：波長為 660nm，并置零
3． 準(zhǔn)備好 5 個(gè) 1.5 毫升離心管，標(biāo)記為 1 至 5 號管
4． 按下表分別加入S B J 陰性液（試劑 D）和 SBJ標(biāo)準(zhǔn)液（試劑 H）到每個(gè)離心管， 混勻
5． 將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表：
管號 SBJ陰性液（試劑 D） SBJ 標(biāo)準(zhǔn)液（試劑 H） 測定體系標(biāo)準(zhǔn)磷濃度
1 0 xx 微升 20 微摩爾/升
2 xx 微升 xx 微升 15 微摩爾/升
3 xx 微升 xx 微升 10 微摩爾/升
4 xx 微升 xx 微升 5 微摩爾/升
5 xx 微升 0 0
