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江蘇菲亞生物科技有限公司
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菲亞提醒您：注意幾點(diǎn)即可防止胎牛血清培養(yǎng)中黑點(diǎn)的生成
2019-2-19 閱讀(1283)
近有客戶(hù)咨詢(xún)胎牛血清細(xì)胞培養(yǎng)中黑點(diǎn)如何防止生成？對(duì)此我司經(jīng)過(guò)詳細(xì)分解，得出以下結(jié)論，為防止客戶(hù)由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對(duì)此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
（1） 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
（2） 培養(yǎng)基無(wú)需 37℃水浴。
（3） 培養(yǎng)基保持PH 值 7.0- 7.2。
（4） 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
（5） 掌握細(xì)胞傳代的時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。
1、化凍 將血清從-20 度冰箱中取出，室溫（或浸于自來(lái)水中）化凍（約需要 30 分鐘至 2 小時(shí)，也可放于 4 度冰箱化凍過(guò)夜；化凍后若不馬上滅活，可以放入 4 度冰箱中暫時(shí)保存）
2、滅活
（1）放入室溫的水浴鍋內(nèi)開(kāi)始加熱（同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶，內(nèi)裝 100ml 自來(lái)水，插入一根溫度 計(jì)，溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn)）
（2）當(dāng)溫度計(jì)顯示 56 度時(shí)，停止加熱，改為間斷加熱，維持 56 度（±0.5 度）30 分鐘（±3 分鐘； 若不小心使溫度上升超過(guò) 56 度，則：若仍未超過(guò) 60 度，且時(shí)間很短，比如不超過(guò) 5 分鐘，則仍可使 用；若超過(guò) 60 度，或者時(shí)間較長(zhǎng)，則棄去不用，或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng)）
（3）取出，自然冷卻至室溫（約需 1-3 小時(shí)） ，可分裝或-20 度繼續(xù)凍存。
3、分裝
（1）轉(zhuǎn)入無(wú)菌間，在超凈臺(tái)內(nèi)將血清分裝入 10ml 離心管中（注意預(yù)先要將血清輕輕搖動(dòng)數(shù)周、混勻； 用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠，很容易產(chǎn)生氣泡；如果產(chǎn)生氣泡， 則在酒精燈火焰上過(guò)一下） ）
（2）放入-20 度冰箱凍存
（3）全部操作約需要 4-6 小時(shí)
