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競爭法ELISA計算方法介紹
2024-5-13 閱讀(52)
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應(yīng)最為敏感。
競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
1. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。
測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值（NCX）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A＞陽性判定值的反應(yīng)為陰性。
2. 抑制率法
抑制率表示標本在競爭結(jié)合中標本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，按下式計算：
抑制率（%）= ELISA試劑盒（陰性對照A值-標本A值）×100%/陰性對照A值，一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
