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人胚腎細(xì)胞操作步驟

2020-8-26  閱讀(466)

 人胚腎細(xì)胞操作步驟:

1. 人胚腎細(xì)胞可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在人胚腎細(xì)胞儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

2. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗刷。

3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中參與臨時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

4. 停止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。

5. 效果判定:可于白色布景上,直接用肉眼查詢效果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:人胚腎細(xì)胞類檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。人胚腎細(xì)胞類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)液。次日洗刷3次。

6. 加一定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷。(一同做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)

7. 于反應(yīng)孔中,參與新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。

8. 于各反應(yīng)孔中參與人胚腎細(xì)胞臨時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘

9. 于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml

特丁隆 標(biāo)準(zhǔn)品  :34014-18-1 250mg

四氯硝基苯 標(biāo)準(zhǔn)品  :117-18-0 250mg

氟苯脲 標(biāo)準(zhǔn)品  :83121-18-0 250mg

七氟菊酯 標(biāo)準(zhǔn)品  :79538-32-2 100mg

雙硫磷 標(biāo)準(zhǔn)品  :3383-96-8 250mg

得殺草 標(biāo)準(zhǔn)品  :149979-41-9 100mg

特草定 標(biāo)準(zhǔn)品  :5902-51-2 250mg

特丁磷 標(biāo)準(zhǔn)品  :13071-79-9 100mg

特丁凈 標(biāo)準(zhǔn)品  :886-50-0 250mg

 

 



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