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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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ATCC細(xì)胞技術(shù)步驟方法
2021-1-27 閱讀(250)
ATCC細(xì)胞方法:
1.細(xì)菌污染
細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入了抗菌素，也可能因?yàn)椴僮鞑簧鞫鹞廴尽３Ｒ姷挠懈锾m氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。
培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，變圓脫落死亡。
2.真菌污染
真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種，常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點(diǎn)，有的散在生長(zhǎng)，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯(cuò)在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。
真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，但由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。
3.支原體污染
支原體是介于細(xì)菌與病毒之間能獨(dú)立生活的微生物，小直徑0.2μm，一般過濾除菌無法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對(duì)有抗藥性。多吸附于細(xì)胞表面或散在于細(xì)胞之間。
培養(yǎng)細(xì)胞受支原體污染后，部分敏感細(xì)胞可見細(xì)胞生長(zhǎng)增殖變慢，部分細(xì)胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細(xì)胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時(shí)處理，還會(huì)產(chǎn)生交叉污染。
4.病毒污染
組織細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。
ATCC細(xì)胞?技術(shù)步驟：
1、取材
細(xì)胞株培養(yǎng)的材料主要來源于外科手術(shù)或活檢瘤組織，取材時(shí)避免用壞死組織，要挑選瘤細(xì)胞集中和活力較好的部位，瘤性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是較好的培養(yǎng)材料。取材后盡快培養(yǎng)，因故不能立即培養(yǎng)者，可凍存。細(xì)胞株的培養(yǎng)方法及凍存方法同前述正常組織。
2、成纖維細(xì)胞排除
在細(xì)胞株培養(yǎng)中?；祀s有一些成纖維細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)能與瘤細(xì)胞同時(shí)生長(zhǎng)，并常壓過癌細(xì)胞，導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)受阻以至消失，應(yīng)仔細(xì)排除。排除方法常有：機(jī)械刮除法、反復(fù)貼壁法、消化排除法、膠原酶消化法等。
3、提高細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長(zhǎng)率
根據(jù)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，細(xì)胞株要經(jīng)過對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)才能生長(zhǎng)，因此不能局限于一般培養(yǎng)法，須采用一些特殊措施。如：用適宜底物，鼠尾膠原底層及飼細(xì)胞底層等。用細(xì)胞生長(zhǎng)因子，根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如胰島素、雌激素等。也可以考慮動(dòng)物媒介培養(yǎng)。
