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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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兔瘟 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)幾點(diǎn)
2021-3-23 閱讀(188)
兔瘟 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒原理
提取樣品 RNA，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA 為模板，以引物為起點(diǎn)合成與 RNA 模板互補(bǔ)的 cDNA 鏈。在 TaqDNA 聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異DN段的拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過(guò)多次循環(huán)，*終使擴(kuò)增DN段放大了數(shù)百萬(wàn)倍。將擴(kuò)增DN段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后，在紫外燈照射下，肉眼可見(jiàn)到 DN段的擴(kuò)增帶。
兔瘟 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)
1． 建議與世亨提供的柱式 RNA 核酸提取試劑盒（含電泳試劑）配套使用。
2． 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照樣品的質(zhì)量控制，需進(jìn)行提取，建議提取用量分別100µL。
3． 所有接觸病料的物品均應(yīng)合理處置，以免污染實(shí)驗(yàn)室。
4． PCR 整個(gè)試驗(yàn)分配液區(qū)、模板提取區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、電泳區(qū)。流程順序?yàn)榕湟簠^(qū)→模板提取區(qū)→擴(kuò)區(qū)→電泳區(qū)。嚴(yán)禁器材和試劑倒流。
5． 所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲(chǔ)存。-20℃保存的各試劑管使用前應(yīng)*融化，8000rpm 離心15s，使液體全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液體時(shí)移液器吸頭盡量在液體表面層吸取，使用后立即放回-20℃。
6． 注意防止試劑盒組分受污染。不要使用超過(guò)有效期限的試劑，試劑盒之間的成分不要混用。
7． 嚴(yán)格遵守操作說(shuō)明可以獲得的結(jié)果。操作過(guò)程中移液、定時(shí)等全部過(guò)程必須精確。
8． 反應(yīng)體系應(yīng)在特定配液區(qū)或者超凈工作臺(tái)中配制，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格控制污染。
9． 反復(fù)凍融試劑將減低檢測(cè)靈敏度，本試劑盒應(yīng)在 3 次內(nèi)用完。
