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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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人胚腎細(xì)胞供體細(xì)胞類型和基因型對(duì)小鼠體細(xì)胞克隆效率的影響
2018-8-8 閱讀(170)
| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 44.8KB |
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人胚腎細(xì)胞供體細(xì)胞類型和基因型對(duì)小鼠體細(xì)胞克隆效率的影響
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 供體細(xì)胞準(zhǔn)備
卵丘細(xì)胞從2-4月齡成熟母鼠獲得，未成熟支持細(xì)胞從0-5日齡未成熟雄鼠獲得。卵丘細(xì)胞通過透明質(zhì)酸酶脫顆粒細(xì)胞獲得。未成熟睪支持細(xì)胞獲得方法如下：
取下的小鼠睪用0.1mg/ml膠原酶與0.01mg/ml脫氧核糖核酸酶37℃處理30min，然后用0.2mg/ml37℃處理5min，去睪懸液即可。睪懸液用含4mg/ml BSA的PBS洗一下就可用于顯微注射了。未成熟睪細(xì)胞根據(jù)其體積與形態(tài)即可確認(rèn)。
2. 受體卵母細(xì)胞的獲得
8-10周齡BDF1雌鼠常規(guī)超排獲得卵母細(xì)胞。7.5IU/只eCG，48h后7.5IU/只hCG。hCG注射后15h脫頸處死小鼠獲得卵母細(xì)胞。(培養(yǎng)箱條件：37.5℃，6.2%CO2。)
3. 核移植
MII期受體卵母細(xì)胞在37℃條件下去核，操作液為含5µg/ml CB的Hepes-KSOM。BDF1染色體在Nomarski光學(xué)鏡下能夠很容易的辨認(rèn)，利用Piezo裝置將紡錘體及其周圍少量胞質(zhì)取出。去核的卵母細(xì)胞在KSOM液中孵育30min-2h使其胞膜*恢復(fù)。供體細(xì)胞在室溫下、Hepes-KSOM液中利用Piezo裝置注入去核卵母細(xì)胞中。供體細(xì)胞的核沒有必要從細(xì)胞質(zhì)中*弄出來，因?yàn)槁亚鸺?xì)胞與未成熟睪支持細(xì)胞的胞膜都是軟的，在注射時(shí)它們的胞膜很容易破。注射了體細(xì)胞的卵母細(xì)胞在KSOM中孵育1-2h使體細(xì)胞的染色質(zhì)凝集。重構(gòu)胚在無Ca2、含3mM SrCl2 與5µg/ml CB的KSOM液中孵育1h，然后在含5µg/ml CB的KSOM液中孵育5h，zui后移入單純的KSOM液中培養(yǎng)72h。
4. 胚胎移植
72h后發(fā)育到桑囊胚階段的重構(gòu)胚移植入8-12周齡假孕3d的ICR雌鼠(小鼠見栓當(dāng)天稱為*)子宮中。8-10枚胚胎移入一側(cè)子宮(16-20枚胚胎移入一種受體小鼠)。在第20d時(shí)，檢測(cè)受體小鼠中成活的胚胎，活著的小鼠讓泌乳ICR雌鼠哺乳。
5. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
在試驗(yàn)1中，利用實(shí)驗(yàn)室小鼠品系檢測(cè)供體細(xì)胞類型與基因型對(duì)看了胚胎發(fā)育的影響。在試驗(yàn)2中，檢測(cè)了野生型基因型(JF1)與129基因型結(jié)合后的基因型克隆小鼠其發(fā)育能力是否比單純的JF1克隆小鼠的發(fā)育能力強(qiáng)。
人胚腎細(xì)胞20 reactions 人雪旺細(xì)胞cDNA HSC cDNA
20 reactions 人神經(jīng)束膜細(xì)胞cDNA HPC cDNA
20 reactions 人星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA HA cDNA
20 reactions 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA HA-c cDNA
20 reactions 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA HA-sp cDNA
20 reactions 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞cDNA HA-h cDNA
20 reactions 人小膠質(zhì)細(xì)胞cDNA HM cDNA
20 reactions 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNA HDMEC cDNA
20 reactions 人血管平滑肌細(xì)胞cDNA HDLEC cDNA
20 reactions 人表皮角質(zhì)細(xì)胞cDNA HEK cDNA
20 reactions 人表皮角質(zhì)細(xì)胞cDNA HEK-a cDNA
20 reactions 人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素cDNA HEM-l cDNA
20 reactions 人表皮黑色素細(xì)胞-中色素cDNA HEM-m cDNA
20 reactions 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素cDNA HEM-d cDNA
20 reactions 人成纖維細(xì)胞-胎兒cDNA HDF-f cDNA
20 reactions 人成纖維細(xì)胞-新生兒cDNA HDF-n cDNA
20 reactions 人成纖維細(xì)胞cDNA HDF-a cDNA
20 reactions 人細(xì)胞cDNA HHDPC cDNA
20 reactions 人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞cDNA HHGMC cDNA
20 reactions 人外根殼細(xì)胞cDNA HHORSC cDNA
20 reactions 人內(nèi)根殼細(xì)胞cDNA HHIRSC cDNA
20 reactions 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞cDNA HLEC cDNA
20 reactions 人淋巴成纖維細(xì)胞cDNA HLF cDNA
20 reactions 人口腔角質(zhì)細(xì)胞cDNA HOK cDNA
20 reactions 人牙齦成纖維細(xì)胞cDNA HGF cDNA
20 reactions 人牙周膜成纖維細(xì)胞cDNA HPLF cDNA
20 reactions 人食道上皮細(xì)胞cDNA HEEpiC cDNA
20 reactions 人食道平滑肌細(xì)胞cDNA HESMC cDNA人胚腎細(xì)胞
